zikavirus 发表于 2016-3-3 22:26:34

中性红和结晶紫染色的区别

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1、中性红为活性染料,其进入细胞膜要求获取储存于活细胞溶酶体的能量而激活,如果细胞膜被任何物质损坏,则其不能被胞吞而储存于细胞内,细胞受损越严重,中性红摄取率更低,检测OD值更小。
    neutral red (百度百科) 定义:细胞活体染色和酸碱性指示剂的一种碱性吩嗪染料。 分子式:C15H16N4.HCl ;深绿色结晶粉末。易溶于水和醇,水溶液呈红色,醇溶液为黄色,其溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活.活细胞被染成红色,而死细胞不变色。这点和台 盼蓝相反。   原理:中性红是一种弱碱性 pH 指示剂,变色范围 pH6.4~8.0之间(由红变黄)。在中性或微碱性环境中,植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌,由于液泡在一般情况下呈酸性反应,因此,进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色,在这种情况下,原生质和细胞壁一般不着色;死细胞由于原生质变性凝固,细胞液不能维持在液泡内,因此,用中性红染色后,不产生液泡着色现象,相反,中性红的阳离子,却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合,而使原生质与细胞核染色。

   但是中性红的光吸收峰值是在540nm,这个数值我用连续光谱检测过,另一个峰值在270nm。在其它人的文献中也是在540nm检测。用570nm检测, 数值会偏低很多。

2、MTT原理
活 细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为非水溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜 (DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与 细胞数成正比。
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