paul 发表于 2016-3-22 17:50:15

求助慢病毒转染的问题

我计划做慢病毒。有些东西有点模糊。请教各位老师:
1.请公司包装的慢病毒,给的滴度10e8。请问可以转染多少细胞。主要担心不知道够不够我做动物试验的。
2.慢病毒转染好后用抗生素筛选容易培养出稳转细胞系吗,如果培养成功,是否就是无限扩增病毒载体?
3.如果2不可以,怎么扩增给我的包装好的病毒。像质粒那样转化大肠杆菌后扩增吗?
谢谢,如果有问得不对的地方,还请不吝指教。谢谢

wwwkkk83 发表于 2016-3-23 09:09:51

1.要看感染的MOI, 如果moi=1, 10e8病毒 可以感染 10e8细胞。
MOI(Multiplicity of Infection,感染复数)是指每个细胞感染的病毒数,通常MOI越高,病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。
对于分裂活跃的细胞,比如Hela、293细胞,MOI=1~3时,80%以上的细胞均表达目的基因。而对于非分裂细胞,比如原代细胞,感染效率较低。需要进行MOI梯度摸索实验,选择适合的MOI进行实验。

2慢病毒转染好后用抗生素筛选容易培养出稳转细胞系,如果培养成功,可以唐无限扩增,挑取表达适中的稳定细胞株,连续筛选并传3代后,冻存保重稳定细胞株。

3包装好的病毒是无法再扩增的。
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