[转移贴]第九届药典委员会病毒类制品专业委员会第二次会议纪要
原贴由论坛会员Rojjer发表于 2008-8-18 09:46按照2010年版《中国药典》三部编制大纲及工作计划， 我委于2008年6月26-27日在北京召开了第九届药典委员会病毒类制品专业委员会第二次会议。 参加会议的有第九届药典委员会执行委员俞永新院士、病毒类制品专业委员会主任委员赵铠院士、 董关木副主任委员；李德富、王佑春、梁争论、阮力、郑晓丽、徐葛林委员， 国家局药品注册司生物制品处尹红章处长， 中检所沈琦副处长、唐建荣副主任、贾丽丽研究员，北京市药品检验所余立研究员； 以及北京天坛生物、北京科兴的相关科研课题负责人。
会议听取了2010年版药典三部病毒类制品相关课题研究的汇报、讨论了各有关课题目前存在的问题， 并就如何进一步开展相关课题提出了意见。会上，委员和专家还审定了天花疫苗企业注册标准。现将会议纪要如下：
一、 病毒类制品相关课题研究进展及专家讨论意见
1. 细胞基质蛋白残留量测定：
1）Vero细胞蛋白残留量测定（ELISA）
北京天坛生物已建立了Vero细胞蛋白残留量测定方法，并经过了中检所的复核检验。中检所、北京天坛生物、辽宁成大三家单位共同完成了对该试剂盒的联合验证。
与会委员和专家一致认为，建立宿主细胞蛋白残留量的检测方法，对疫苗纯化工艺效果评价有着重要的意义。该检测试剂的制备过程、验证程序符合相关要求，下一步的工作重点是：（1）进一步完善检测方法，提高检测的准确性：包括限定空白A值范围、建立复孔比数值以及内部参比疫苗的A值等；（2）国家药典标准中检测指标的制定：即应首先确定乙脑灭活疫苗的质控标准，已获得生产批准的乙脑灭活疫苗生产企业应对现有全部留样进行检测，统计检测结果，拟定检测指标。检测用试剂盒由北京天坛生物提供；（3）北京天坛生物应进一步开展Vero细胞结构蛋白含量测定方法的研究，使得该检测试剂盒能够适用其他Vero细胞制备产品的检测。
2）地鼠肾细胞蛋白残留量测定（ELISA） 北京天坛生物已经完成检测方法的初步建立，目前正由中检所进行复核检验。中检所将组织有关单位进行试剂盒的联合验证。会议要求课题承担单位应进一步完善方法的适用性研究，特别是含佐剂制品对检测结果的影响。
2. 逆转录酶活性测定（PERT法）再验证
为进一步对药典收载PERT方法进行验证， 通过分析以往验证结果，委员、专家认为，药典收载方法检测逆转录酶活性的灵敏度为10-8，疫苗一室建立的方法为10-7，灵敏度的不同可能是导致检测结果差异的原因之一，即使是PERT检测阳性结果也并不代表逆转录病毒的存在，关键是对PERT检测阳性结果的进一步确证。 对于如何进一步开展PERT法的验证工作，委员和专家建议：（1）继续完成正在开展的再验证工作，尽快完成盲样检测，并将验证结果提交专业委员会讨论；（2）确认PERT法对普通级和SPF级地鼠肾细胞进行检测有无差异；（3）成都生物制品研究所提供样品，包括原代地鼠肾原液，原代地鼠肾细胞，非SPF地鼠肾原液和由SPF地鼠生产的疫苗，分别采用药典方法和疫苗一室方法进行检测，同时送英国BioReliance实验室用PERT法检测以验证方法。
3. 抗生素残留量测定： 北京药检所在抗生素微生物检定法（管碟法）的基础上，为适用生物制品的检测，在检测灵敏度和抑菌对照等方面进行了优化，建立了微生物培养法检测病毒性疫苗中的抗生素残留量。但目前该法还无法消除制品中的各种抑菌成分对检测的干扰。 鉴于此，委员和专家建议（1）北京药检所应继续开展该检测方法在适用性、稳定性的研究；（2）同时开展采用ELISA法检测生物制品中抗生素残留量的研究。会议要求所有病毒性疫苗生产企业采用ELISA法分别对现有留样的原液和成品进行抗生素残留量检测（每个制品至少10个批次）；同时，中检所各有关科室也分别对各自所负责检定的制品采用ELISA法测定抗生素残留量。于9月底前，将全部检测结果汇总到中检所生检处，同时并抄送国家药典委员会，以便于提交专家会讨论，为抗生素残留量检查方法的确定和检测指标的制定提供数据支持。
4. 牛血清病毒外源因子检测
中检所和武汉三利公司正在合作开展采用PCR和荧光抗体检测牛血清中特异性外源病毒的相关研究。目前已完成相关病毒毒种的引进和检测方法的初步建立。下一步将对检测方法进行验证。委员和专家建议：（1）在建立特异性病毒外源因子检测的同时，应加强对未知病毒的检测，包括采用现有的病毒外源因子检测方法对血吸附或非血吸附类病毒的检测；（2）对某些特异病毒，可选择敏感细胞进行培养，盲传三代，每代培养物观察细胞病变，未出现病变的培养液上清可再经PCR或荧光抗体检查病毒的存在。（3）新版药典 “小牛血清质控要求”中应增加除牛腹泻病毒以外的其他相关的特异性牛病毒的检查，牛血清生产企业和使用单位应采用适宜的方法进行检测，证明牛血清中无相关病毒的污染， 检测方法可暂不规定。
5. 三氯甲烷残留量测定
北京科兴已经完成了采用毛细管气相色谱法测定三氯甲烷残留量的相关系统适用性、精确性、准确性等方面的研究工作，并初步建立了检测的操作方法。会议要求：（1）检验加样应采用顶空进样方式，以确保检测的精确性；（2）课题承担单位进一步完善检测系统适用性的研究，特别是产品中铝剂对检测的干扰；（3）课题承担单位应在7月底前按要求完成检测操作方法的建立， 制定初步的试验操作细则，提交中检所进行检测复核。（4）检测复核后制定标准的操作细则，发给各有关生产单位对各自留样进行检测，11月底前，统计检测结果汇总到国家药典委员会，以便提交专业委员会审定并确定检定指标。
6. 乙脑疫苗成品鉴别试验
北京天坛生物完成了乙脑疫苗鉴别试验（ELISA法）的有关特异性、精, 密性、适用性以及稳定性方面的研究工作， 并初步建立了检测方法。会议要求进一步完善以下方面的工作：（1）应将现有的全部病毒类制品进行检测，以进一步验证试剂盒的特异性；（2）合理确定检测试剂的cutoff值：课题研究单位应将乙脑减毒活疫苗和灭活疫苗的参考品分别倍比稀释，确定各自阴性结果的稀释度， 在此稀释度的基础上分别提高2个稀释度对应的A值作为判定结果的cutoff值。
7、其他科研课题
确定为2010年版药典三部病毒类制品的其他科研课题，如：狂犬病疫苗鉴别试验的建立、流感疫苗中间产品质量控制、狂犬病疫苗病毒灭活验证试验方法提高检测灵敏度等应根据会议纪要要求，在2008年10月前完成课题验证工作，请各课题承担单位及时向我会提交课题进展情况报告， 以便安排专业委员会审定。
二、天花疫苗企业注册标准的审定
北京天坛生物介绍了天花疫苗的生产历史背景、 生产工艺、 当前产量以及标准的修订和试验验证的有关情况。 经委员、专家讨论， 标准修订见附件1。 会议要求各有关单位继续努力，积极配合， 相互协作，按照本次会议的有关要求， 进一步完成好相关课题的验证工作，确保2010年版药典三部病毒类制品相关科研课题均能够按计划如期完成。 各课题牵头单位应注意方法学建立和验证数据的收集，并按照附件2 （2010年版药典三部病毒类制品科研课题研究提供相关资料的要求）提供相关资料。 对于预防类制品企业注册标准的审核工作， 此次会议再次强调应按确定的病毒滴度进行半成品配制（即点配制），以保证减毒活疫苗批间一致性。各有关生产单位应按此要求加紧修订企业注册标准， 并及时反馈药典会生物制品处， 我会将按照有关程序报国家局批准执行。
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