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标题: 铺板经验交流 [打印本页]

作者: iridos 时间: 2016-3-14 17:55
标题: 铺板经验交流
实验室铺板秘籍（6，24.....孔）
      如果要下药或者转染啊之类的，第一步就是要把细胞从你的培养瓶里接种到板上，当然，有时候提取rna或者质粒的也可能要铺板，但是前者更需要你的细胞铺得均匀，密度适中，要不然直接影响实验效率。

      首先把你的细胞用trypsin消化下来，然后再按照你所需要的比例和新的培养基混合。一般都是在细胞需要传代的时候铺板，这样子，你可以顺便把传到培养瓶里面的细胞也一同算进去。

      接下来，就是接种了，是不是直接用枪头把细胞加进去，然后盖上盖子放进孵箱就完事了呢？当然不是。

      秘籍1：可以首先在每个孔里面加入适当的培养基，然后用力摇匀，至孔里表面上有一层均匀的薄薄的液体培养基最佳！！这样子可以在细胞加进去时，就使表面张力趋于平均，不至于扎堆。我个人一般用24孔板时，加入250微升培养基。但是可以自己摸索量，加少了液膜太薄，作用不明显；加多了，等你把细胞液也加进去，说不定孔就快满了，对后面的步骤有极大的影响，而且容易污染

      秘籍2：加入细胞液的时候一滴一滴地加！！加的位置最好在孔的各个部位，以均匀为好，加液体时液滴最好也不要碰到孔壁，要不然就直接在孔边缘处聚集了，这样子也不好的。

      秘籍3：加细胞悬液到板上的时候，不要忘记时常吹打或者摇晃你手上那一管子细胞悬液（不是孔里面）！！因为在你往孔里面加细胞悬液的时候，细胞可能已经有一定数量沉底了。所以要吹打或者摇。

      秘籍4：摇，用力地摇！！等你把东西都加好了之后，用力摇板，但是有技巧的，那就是前后摇，左右摇，一次只有一个径向的方向。千万不要顺时针或者逆时针环状地摇，这样子会在中央形成漩涡，那就前功尽弃了，细胞都被吸到中间了。而且，要注意孔里面液体的量，不要溅出来了。

      最重要的猜一下是哪一个？就是秘籍4啦，即使你前几步都没有用，但是最后一步摇摇乐是必需的，要不然就很容易扎堆。

   最后，要记得在边缘写上你的名字和对应每列或者每行孔的标志。

作者: iridos 时间: 2016-3-14 17:56
实验无小事，呵呵

作者: ipsvirus 时间: 2016-3-14 18:59
很好的分享，实验室很多新生铺板都不匀

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