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标题: JM109，DH5a，BL21,TOP10,Stbl3,DH10B等感受态的区别 [打印本页]

作者: wwwkkk83 时间: 2016-3-16 15:56
标题: JM109，DH5a，BL21,TOP10,Stbl3,DH10B等感受态的区别
1：DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1

2：BL21(DE3) 菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）

3：BL21(DE3) pLysS菌株

该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr

4：JM109菌株

该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株

基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]

5：TOP10菌株

该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG

6：HB101菌株

该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验

基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1

7. JM110或 SCS110

大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生dam,dcm，从而受到甲基化的影响.

部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。

大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如XbaI, BclI等。而且甲基化只发生在特定序列，以XbaI为例，只有在位点序列旁出现GA或TC，该XbaI位才会被甲基化。

而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法：
（1）选用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化影响；

（2）利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备，如E.coli JM110和链霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。

E.coli JM110
要排除dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110

如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会被甲基化.

8. BJ5183:（腺病毒重组用）
BJ5183 钙转感受态细菌是一种通过细胞同源重组的内在机制，进行重组腺病毒构建，同时也是真核生物细胞DNA 的复原和克隆，适应于化学性休克处理的宿主大肠杆菌菌种之一。适合后续基因导入、大质粒转染、噬菌体表面展示技术、重组DNA 实验、构建cDNA 库，尤其是腺病毒载体和穿梭载体共转染等实验。产品即到即用，性能稳定，活力保证，转染满意，繁殖活跃。
其基因型为endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR Strr标记；通过recET基因（RecE通路）实施保守性双链DNA断裂修复，从而具有高度基因同源重组（homologous recombination）活性，且稳定传代的特点。其单纯质粒转化效率为1.0 X 108转化菌落/微克pUC19。

9. DH10B菌株
基因型：
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 endA1 recA1 deoR Δ(ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG rpsL λ-
The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。
host for pUC and other α-complementation vectors; pBR322
useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues，useful for plasmid rescue procedures。

DH10B
F- endA1 recA1 galU galK deoR nupG rpsL ΔlacX74 Φ80lacZΔM15 araD139 Δ(ara,leu)7697 mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) λ-
1.suitable for cloning methylated cytosine or adenine containing DNA
2.an MC1061 derivative (Casadaban80). Prepare cells for chemical ansformation with CCMB80 buffer
3.blue/white selection deoR
4.Streptomycin resistant

DH10B 菌株的基因型为： F- mcrA .(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ.M15 .lacX74 recA1 endA1 araD139 . (ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG

BMDH10B感受态细胞是采用大肠杆菌DH10B菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的化学转化。使用pUC19 质粒检测，转化效率可达108 ，－70 ℃ 保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。产品特点： ⒈可高效转化大小为150Kb质粒，用于产生cDNA或基因组文库。 ⒉用于蓝、白斑筛选。

10. Stbl3 常规质粒制备的宿主菌，可进行蓝白斑筛选；复制慢病毒载体系统推荐使用的菌株，对慢病毒载体等较大的质粒转化的效果好，有效减低错误重组的可能性。
大肠杆菌Stbl3™菌株能有效地抑制长片段末端重复区的重组，非常适合于含有同向重复序列的慢病毒和其他反转录病毒载体的复制。此外，细胞非常稳定，能提高慢病毒载体或其他不稳定载体的克
隆效率。

Stbl3™ E. coli 菌株设计用于克隆慢病毒表达载体中的正向重复序列。与 TOP10 E. coli 不同，这些细胞能降低 ViraPower™ 慢病毒和其它逆转录病毒载体中长末端重复 (LTR) 的有害同源重组频率。此外，Stbl3™ 细胞表现出比 SURE® 细胞更高的稳定性，显著改进了慢病毒克隆的效率。Stbl3™ 细胞的 DNA 产量通常比 TOP10 之类的常规菌株高 10 倍（表 1）。 One Shot® Stbl3™ 化学感受态细胞 (One Shot® Stbl3™ Chemically Competent Cell) 提供：
更高的基因组克隆容量 (mcrB, mrr)
>1 x 108 转化子⁄µg 的效率
非常高的 DNA 产量
基因型：F- mcrB mrr hsdS20 (rB-, mB- ) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (Str ) xyl-5 λ- leu mtl-1r

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