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标题: 实验室常用溶液配制(希望对大家有帮助) [打印本页]

作者: iridos 时间: 2016-3-17 12:18
标题: 实验室常用溶液配制(希望对大家有帮助)
一. 常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，
须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2•6H2O于足量的水中，定容到100ml。
100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。
100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂（Denhardt’s regent）
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（组分V）
水 2g 2g 2g
加水至总体积为100ml ,依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 贮液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）:50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）:0.5ml 10 mg/mL 贮液 ,水: 2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。
100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液
成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP
10mmol/L dCTP
10mmol/L dGTP
10mmol/L dTTP
水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液
2ul 100 mmol/L dCTP 贮液
2ul 100 mmol/L dGTP 贮液
2ul 100 mmol/L dTTP 贮液
12ul

20％PEG 8000/2.5M NaCl
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20％聚乙二醇
2.5mol/L 氯化钠
水 20g
50ml 5 mol/L 氯化钠或 14.6g 固体氯化钠
补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）
3mol/L 氯化钠
水 88.2g
175.3g
补足1L
溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。
DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺（deionized formamide）
直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。
磷酸缓冲液（phosphate buffer） (略)
TE（用于悬浮和贮存DNA）
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl
1mmol/L EDTA
水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）
200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
98.8ml
Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）(略)
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L 乙酸
100 mmol/L EDTA
水 242g
57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）
200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水 54g
27.5g 硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L

染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。
凝胶上样液（gel loading solutions）
6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠
6 mmol/L EDTA
18％聚蔗糖（400型）
0.15％溴甲酚绿
0.25％二甲苯青FF
水 300ul 10N 氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
15％聚蔗糖（400型）
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.5g
补足到10ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝
0.25％二甲苯青FF
15％聚蔗糖（400型）
水 2.5ml 1％溴酚蓝
2.5ml 1％二甲苯青FF
1.5g
补足到10ml

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
50％甘油
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
3ml
3.9ml

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
40％聚蔗糖
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
4g
补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝
0.2％二甲苯青FF
200 mmol/L EDTA
0.1％SDS
50％甘油
水 20mg
20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
100ul 10％ SDS
5ml
补足到10ml

三.常用培养基
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
氯化钠 10g

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
氯化钠 0.5g
1 mol/L 氯化钾 2.5ml

用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 12g
酵母提取物 24g
甘油 4ml

各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 16g
酵母提取物 10g
氯化钠 4ml

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 20g
酵母提取物 10g
葡萄糖 20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素
氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

作者: iridos 时间: 2016-3-17 12:19
几种溶液的配制方法
1、PBS:
取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。
2、TBS：
2.1 Tris缓冲液配方：（0.5 M pH7.6）
Tris（三羟甲基氨基甲烷） 60.57g
1N HCL 约420ml
双蒸水加至1000ml
Tris缓冲液配制方法：
先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。
2.2 TBS配方：
Tris-HCI缓冲液（0.5M pH7.6） 100ml
NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)
双蒸水加至1000ml
TBS配制方法：
先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。
3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）：
3.1 储存液：
A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸（C6H8O7•H20）溶于1000ml蒸馏水中。
B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7•2H20）溶于1000ml蒸馏水中。
3.2 工作液：
0.1 取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.0

4、胰酶（Trypsin）：
4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液：
常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。
4.2 ZLI-9010胰蛋白酶：
取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。
5、胃酶（Pepsin）：
4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。
（我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购）
6、DAB：
6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit：
使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。
6.1 ZLI-9030 DAB：
6mgDAB溶于10mlTBS（0.05M pH7.6），再加入0.1ml浓度为3％的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。
7、AEC：
4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。
8、RIPA：
1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。
8.1 10mg/ml l/ml）MSF异丙醇溶液（用量为10
l/ml）8.2 Aprotinin（Sigma产品，用量为30
8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液
l/ml）（用量为10
9、Blotto A：
常规使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。
10、Blotto B：
与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。

作者: rentianyixu 时间: 2016-3-17 12:29
实用贴，全面，收藏了

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