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标题: 鸡红细胞吸附试验-筛选重组病毒 [打印本页]

作者: mullischan 时间: 2016-3-28 15:54
标题: 鸡红细胞吸附试验-筛选重组病毒
本人近来又重新试着用鸡红细胞吸附实验来筛选重组痘苗病毒。有以下问题要请教各位，恳请指导和交流：
简单介绍自己的实验：和其他病毒类似，重组痘苗病毒因为外源基因插入HA序列后即造成血凝素失活( HA -) ,而使重组子不能吸附红细胞,未发生重组的痘苗病毒因为HA表达血凝素可以吸附红细胞。理论上，在显微镜下大致可以分辨出哪些蚀斑吸附红细胞，哪些蚀斑不吸附，然后挑选出不吸附的蚀斑即是重组病毒子，反复筛选可进一步纯化。

问题一：鸡红细胞对普通细胞都有特异性吸附？
自己制备的鸡红细胞对没有感染病毒的Vero细胞（贴壁细胞）都有吸附现象？没有HA表达怎么会出现吸附红细胞呢？
问题二：如何挑选重组病毒？（操作）
在显微镜下观察，可以基本确认不吸附红细胞的重组痘苗病毒子，但是具体如何从6孔板里面挑选出这些重组痘苗病毒，是用细胞刮刀根据已经标记记号刮下蚀斑然后转移？如何保证无菌？
有没有其他更好的方法？

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