中国病毒学论坛|我们一直在坚持！

标题: 关于病毒感染不同时间点取样的疑问 [打印本页]

作者: cdngt 时间: 2016-10-9 10:09
标题: 关于病毒感染不同时间点取样的疑问
刚开始做病毒实验，有很多不太明白的地方，请高手解答。。
实验中需要做到病毒感染后取不同时间点的感染细胞，用作磷酸化蛋白质的western，培养器皿用六孔板，需要取到0h、1h、2h、4h、8h、12h、24h、48h，操作步骤中需要将稀释后的病毒液接种到单层细胞上，37℃吸附1h，然后去病毒液，PH3.0的甘氨酸作用1min，再用pbs润洗三次，加入2%FBS的MEM培养液2ml，37℃培养。
我有几个疑问:
1.时间点的选取是从加入病毒液开始，还是病毒吸附1h过后再开始算？
2.PH3.0的甘氨酸起什么作用的？能否省去吸附后的几个步骤，就是说可不可以在病毒吸附1h后直接加入培养液继续培养？
3.不同时间点取得样品怎么处理？是把细胞冻在-20℃等全部取样一起裂解，还是取一次就裂解一次细胞然后把蛋白定量变性，-20℃保存？感觉对样品蛋白都有一定影响的，望指教！！！

欢迎光临中国病毒学论坛|我们一直在坚持！ (http://virology.com.cn/)