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标题: Nature biotechnology：应用慢病毒载体检测CRISPR-CAS9和TALEN脱靶 [打印本页]

作者: wwwkkk83 时间: 2015-2-2 18:33
标题: Nature biotechnology：应用慢病毒载体检测CRISPR-CAS9和TALEN脱靶
近日，国际生物学期刊nature biotechnology在线刊登了美国科学家的一项最新研究成果，他们应用整合酶缺陷的慢病毒载体（IDLV）检测CRISPR-CAS9和TALEN对基因组造成的脱靶效应，最低可检测1%的脱靶频率。这项研究或对推广CRISPR-CAS9和TALEN技术，保证基因操作的准确性具有重要意义。

目前，CRISPR-CAS9和TALEN技术已经广泛应用在基因操作平台，但脱靶效应一直是科研人员应用这两项技术面临的最大担心和问题，脱靶会造成基因组的不稳定并会扰乱正常基因的功能。在之前的一些工作已经发现一些方法可以预测筛选脱靶位点，但这些研究方法都不能在体内很好匹配体外的预测结果,因此如何提高预测的准确性，优化预测方法成为推广应用CRISPR-CAS9和TALEN技术必须要解决的问题。

之前几个研究小组已经报道，双链IDLV能够通过非同源末端连接的方法特异性插入到基因组双链断裂DNA上，这种策略使体内标记核酸酶产生的双链断裂DNA成为可能，并被用于检测锌指核酸酶的脱靶切割位点。因此，Xiaoling Wang等人将IDLV用于衡量CRISPR-CAS9和TALEN的脱靶活性。

综上所述，该文章通过整合酶缺陷的慢病毒载体(IDLV)检测了CRISPR-CAS9和TALEN的脱靶效应，并对这两种技术的脱靶效应具有很高的检测效率。这项技术的应用或为推广CRISPR-CAS9和TALEN技术，保证基因操作的准确性起到重要推动作用。

Unbiased detection of off-target cleavage by CRISPR-Cas9 and TALENs using integrase-defective lentiviral vectors

Xiaoling Wang, Yebo Wang, Xiwei Wu, Jinhui Wang, Yingjia Wang, Zhaojun Qiu, Tammy Chang, He Huang, Ren-Jang Lin & Jiing-Kuan Yee

The utility of CRISPR-Cas9 and TALENs for genome editing may be compromised by their off-target activity. We show that integrase-defective lentiviral vectors (IDLVs) can detect such off-target cleavage with a frequency as low as 1%. In the case of Cas9, we find frequent off-target sites with a one-base bulge or up to 13 mismatches between the single guide RNA (sgRNA) and its genomic target, which refines sgRNA design.

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