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标题: 病毒多角体 DNA 的提取 [打印本页]

作者: 樽满秋华 时间: 2015-5-24 12:52
标题: 病毒多角体 DNA 的提取
原帖地址：http://biosky.haotui.com/thread-3046-1-13.html 原帖发布人：fgzfeng

将约109的病毒多角体悬于400μl双蒸水中，加入200μl 3×DAS溶液，37℃碱解15min。在3000rpm离心5min去除未裂解的多角体，将包含有病毒粒子的上清转移至一新离心管中。加蛋白酶K至终浓度为200μg/mL，置于50℃水浴中酶解2.5h，然后加SDS至终浓度为1％，继续作用0.5h。等体积Tris饱合的苯酚抽提一次，等体积的苯酚/氯仿（1:1）抽提一次，加入两倍体积的95%乙醇沉淀，混匀后在-70℃沉淀5min或在-20℃沉淀30min。12,000rpm离心15min，用70%乙醇洗涤沉淀一次，吹干。用60μl双蒸水溶解，4℃保存备用。
3×DAS溶液：0.3mol/L Na2 CO3, 0.5 mol/L NaCl, 0.03 mol/L EDTA, pH10.5。

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