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标题: 噬菌体效价测定法[转贴] [打印本页]

作者: cao1976    时间: 2015-6-16 15:38
标题: 噬菌体效价测定法[转贴]
一. 点滴法

1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时。

2. 取300 μl 寄主细菌悬浮液加入5 ml 冷却至45℃的0.7﹪琼脂培养基中,均匀混合后立即平铺于已凝固的1.8﹪琼脂培养基上,并静置30分钟以上使其凝固。

3. 以1% peptone为稀释液,将噬菌体原液做10倍序列稀释,一般稀释至107倍即可。

4. 将平板划分为八个区域,以pipetman取不同稀释倍数之噬菌体稀释液各 1 μl,分别接种于不同的区域上。

5. 将平板置于适合的温度下,一般培养8~24小时,待溶菌斑产生后观察并计算其数目。一般噬菌体浓度太高的区域会融合成一个大的溶菌斑,而浓度适中的区域会形成肉眼可观察的溶菌斑。

6. 噬菌体效价 (pfu/ml)=溶菌斑数×稀释倍数×取样量折算数

例如:噬菌体原液稀释倍数为106,取样测定量为0.001 ml (则取样量折算数为1000),三个滴定点的溶菌斑数目分别为15、18、16,则噬菌体原液的效价为:

1/3(15+18+16)×106×1000=1.63×1010 (pfu/ml)



二. 双层琼脂培养法

1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时。

2. 以1% peptone为稀释液,将噬菌体原液做10倍序列稀释,一般稀释至107倍即可。

3. 取噬菌体稀释液100 μl 与寄主菌液300 μl均匀混合,静置15分钟使其感染。

4. 将上述混合液加入5 ml 冷却至45℃的0.7﹪琼脂培养基中,均匀混合后立即平铺于已凝固的1.8﹪琼脂培养基上。

5. 将平板置于适合的温度下,一般培养8~24小时,待溶菌斑产生后观察并计算其数目。

6. 噬菌体效价 (pfu/ml)=溶菌斑数 ×稀释倍数 ×取样量折算数

例如:噬菌体原液稀释倍数为107,取样量测定量为 0.1ml (则取样量折算数为10),三个平板的溶菌斑数目分别为275、252、263,则噬菌体原液的效价为:

1/3(275+252+263)×107×10=2.63×1010 (pfu/ml)




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