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标题: [转移贴]新手请教杆状病毒表达问题 [打印本页]

作者: virology 时间: 2015-7-7 15:36
标题: [转移贴]新手请教杆状病毒表达问题
原贴由nulan284 发表于 2010-8-21 18:17
http://biosky.haotui.com/thread-16520-1-6.html

我正在做baculovirus表达重组蛋白的实验，使用的是Invitrogen的BAC-BAC系统，pfastbac dual质粒。我按照说明书的方法转染两次，p2代病毒做细胞免疫荧光实验，都没有检出蛋白，现请高手指点。

转染之前用invitrogen推荐的试剂盒提质粒，并经过pcr鉴定正确，0.4ug/ml，1ug-8ug不同梯度的质粒转染，其他转染试剂的量不变，一代转到7天都没有见到细胞病变，二代转染3天无病变，做细胞免疫荧光无结果。

我分析不出是哪里的问题，还请高手指教，多谢。

以下为会员回复:

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stare024 发表于 2010-8-21 18:39 :很可能是转染不成功。

建议重新转染，转染之前测定提取的bacmid质量如何。

转染成功的话即使检测不到蛋白表达，

细胞也会发生病变的。

要不然不会没有病变的。

zhpu2008 发表于 2010-8-22 11:09 : 一方面可能是2楼说的没转成功，另一方面可能是目的基因不表达，有很多情况就是目的基因在某一载体系统里不会表达，可以换换载体试试！

sibswjc 发表于 2010-8-22 11:46 :0.4ug/ml的bacmid浓度太低了，我一般低于1ug/ul的都扔掉的，溶解bacmid的时候少加点dd水，或者同时抽几管，转染时多加点，10-20ul，应该能够检测到蛋白表达。

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