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标题: bac to bac 系统供体质粒构建可选用的感受态细胞？ [打印本页]

作者: cao1976 时间: 2015-7-10 15:05
标题: bac to bac 系统供体质粒构建可选用的感受态细胞？
原贴由lingbi1982发表于 2011-9-25 22:22
http://biosky.haotui.com/thread-25610-1-4.html

杆状病毒 bac-to-bac 系统，说明书上有这么一段叙述
Once you have cloned your insert into one of the pFastBac™ vectors, you will
transform the ligation reaction into E. coli and select for ampicillin-resistant
transformants. You may use any recA, endA E. coli strain including TOP10,
DH10B™, or DH5a™ for transformation. Do not transform the ligation reaction
into DH10Bac™ cells.

就是说构建供体质粒时用TOP10, DH10B™, or DH5a™感受态细胞做转化是可以的，但是用DH10bac 不行，那是为什么呢？

作者: cao1976 时间: 2015-7-10 15:06
本帖最后由 a86856635 于 2011-9-26 07:08 编辑

recA, endA
recA (Recombination)
功能：recA 基因表达 ATP 依赖型 DNA 重组酶，它在λ-噬菌体与基因组 DNA 的溶原重组
时起作用，同时具有对 DNA 放射性损伤的修复功能。由 recA 基因的变异所产生的基因型
使同源或异源 DNA 的重组不能进行，保持插入 DNA 的稳定性，对 DNA 的转化有利。一个
菌株的基因型如果是 recA，则说明此菌株的表现型是重组缺陷的
endA (Endonuclease)
功能：endA 基因表达非特异性核酸内切酶 I，它能使所有 DNA 双链解开，在 DNA 的复制
和重组中起重要作用。endA 基因的变异将使插入的外源 DNA 更加稳定，提取的质粒纯度
更高。

作者: cao1976 时间: 2015-7-10 15:06
lingbi1982 发表于 2011-9-27 21:57 | ：

多谢您的解释。

是不是这么理解recA、endA的基因产物分别为促进DNA 修复、内切酶纠正作用，有利于DNA的连接，DH5a中有这两种物质，而DH10bac中没有，所以不是首选呢？

另外，既然是连接产物那就是基因与载体片段重新连接成环状了，跟完整的质粒一样，只需要进入感受态细胞，与菌体同时复制就可以了，没有连接、纠错的需要了，那为什么必须recA\endA ?

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