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标题: [转移贴]芭蕉属（如芭蕉、香蕉）的植物用什么方法提总RNA？ [打印本页]

作者: cao1976 时间: 2015-7-19 10:39
标题: [转移贴]芭蕉属（如芭蕉、香蕉）的植物用什么方法提总RNA？
原贴由苹花开果发表于 2008-11-12 09:48
http://biosky.haotui.com/thread-7148-1-8.html

最近在提表现CMV症状的芭蕉的totalRNA，想做进一步的RT-PCR及Northern Blot 分析，但是我用实验常用的方法提了几次，电泳条带都没有，有那位行家能帮忙想想办法，不胜感激！！
实验常采用Triol法:（对于烟草、番茄等都十分有效）
A.0.1g叶组织用液N研磨成粉末，加1mlTrizol磨匀，移至1.5mlEP管中。
B.涡旋数秒，在室温下放置10min,然后加1/5体积的氯仿，上下颠倒混匀30s。
后来鉴于几次都没提出来，分析是否是芭蕉上含糖量高，在这一步试了下酚氯仿等体积比抽提，还是没有出来结果
C.室温静置3min,12000rpm,4℃,离心10min。
D.取上清，加等体积的异丙醇，混匀，在-20℃下放置10min。
E.12000rpm, 4℃,离心10min。
F.去上清，用500-700ul的70%乙醇（DEPC-H2O处理）洗沉淀。
G．12000rpm ,4℃,离心2min。
H．用移液枪吸去上清，真空干燥5-10min。
I．加40ulDEPC-H2O溶解。
J. 可用1.5%的TBE胶跑总RNA。

以下为会员回复：
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wwwkkk83发表于 2008-11-12 14:25 ：没做过植物的。
听过CTAB法抽提植物核酸。

要不，就用试剂盒吧

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苹花开果发表于 2008-11-13 10:20 ：
谢谢楼上的提示

在基因酷中找到以下方法
【根据文献(Shujun Chang, 1993) CTAB法，稍作改进。】2 z, _( b1 f1 E1 u4 L
1、将4mL提取液加入到lOmL离心管c卜650C水域加热。* `# w1 l% G/ Q. {1 [
2、用液氮冷却研钵，在研钵中加入少量的抗氧化剂PVP，取1g低温冷冻的银杏叶片，迅速置于研钵中，不时加入液氮以防止研磨过程中叶片融化，充分研磨后，立即加入到预热好的提取缓冲液中，用手摇功混匀。
; c' y& ]1 @8 V- E0 ^$ A# G6 r4 R3、 65℃，水域1 min后冷却至室温。. L4 C3 @. N$ ^& O8 r% h% l
4、加入等体积(4mL)的氯仿:异戊X17 (2=L: 1)，混匀，10000rpm, 40C，离心10 min。 j% [$ P% D% d/ L
5、小心吸取上清液，加入等体积(4mL)的仿:异戊醇(24: 1),混匀，10000rpm, 40C,离心10 min。2 }+ U" g4 n- c0 |
6、吸取上清液，加1/4体积的IOMLiCL,混合，4℃沉淀过夜，然后10000rpm离心20 min。$ }+ u; b2 }- `% d+ b
7、用枪吸干，用500u L SSTE溶解沉淀，转到1.5m L离心管.加等体积氯仿:异戊醇混匀，10000rpm, 40C，离心10 min。
( W" L, K7 T6 e/ A- d8、离心吸取取上清液，加两倍体积的无水乙醉，-70℃沉淀至少30 min，或一200C下沉淀2 h。4 d, \3 o1 c- e- ]
9、 12000rpm, 40C,离心20 min，去上请用70%的乙醇洗两次，吹干沉淀。
10、用40 u LDEPC处理的水溶解沉淀，得到RNA样品。
11、除用于电泳和紫外检测外，其余RNA-70℃冰箱保存备用。
有机会试试！！1

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bluebell501 发表于 2008-11-19 12:53 ：takara有试剂盒，有一个高糖阿之类组织RNA抽提的试剂盒，说是香蕉的可以用，可以给公司联系下 ————————————————————————————————————————fzwish20000 发表于 2009-2-24 10:42：通用植物总RNA提取试剂盒

特点：

适合绝大多数植物，特别是TRIZOL和QIAGEN RNasy mini kit无法提取的植物；例如：棉花、苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、番茄果实、茄子、松针、杨树；草坪植物（马蹄金、早熟禾、高羊茅），树（云杉、獐子松、紫椴、花楸、白桦、山毛榉、海棠花、槭槭），观赏植物草和花（紫罗兰、毛爪草、丁香、月季、天竺葵、仙客来、菊花、牵牛花），观赏植物叶子（紫松果、彩叶草、一品红、夹竹桃、垂叶榕）等。

操作简单快捷，提取时间在40分钟左右；
特殊的DNA去除方法，最大限度的去除DNA污染；
纯度高，条带清晰完整，可直接用于RP-PCR和Northern等研究。

这个盒子提香蕉很不错,百泰克的

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