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标题: 有谁用pMAl系统做过原核表达 [打印本页]

作者: 序道 时间: 2015-8-12 19:56
标题: 有谁用pMAl系统做过原核表达
pMAL系统做原核表达，表达蛋白的纯度及量怎么样，有做原核表达更好的系统吗，表达的蛋白需要提纯做多抗？

原帖链接：http://biosky.haotui.com/thread-20228-1-6.html?jdfwkey=vtrww
楼主：bfvirus

作者: 序道 时间: 2015-8-12 19:57
1#未知树

我们实验室用的就是这个系统。总得来说，表达量和纯度还是比较理想的。
但是，这个要根据蛋白来定。前前后后，实验室用它表达了10中以上的蛋白，大部分是很纯的，表达量也非常大。但是，个别蛋白，表达出来之后挂不上柱子，当然，这个蛋白是我们突变之后的，也许这个突变位点影响了蛋白的折叠，导致了MBP无法挂柱。

有一点儿不方便的是：该蛋白的融合标签太大，在40kDa左右，制备多抗之前，需要用Factor Xa切除。这样，要求你所纯化的蛋白量非常大，并且，有些蛋白不是很稳定，在切除标签之后，发生了讲解。

如果你不切除标签蛋白，制备的抗体，基本是很难用于更精细的实验的。比如IF，会有比较多的背景。

作者: 序道 时间: 2015-8-12 19:58

2#未知树

用不切除标签的融合蛋白免疫兔子制备多抗，用于western blot，特异性还是比较高的。
祝你好运~~

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