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标题: [转移贴]怎样建立一个ＨＢＶ体外感染模型？ [打印本页]

作者: hantavirus 时间: 2015-8-21 16:29
标题: [转移贴]怎样建立一个ＨＢＶ体外感染模型？
原贴由yaoming发表于 2009-7-22 01:15:

我想和大家一起来讨论这个问题，虽然我也是做ＨＢＶ的，但是对这方面了解不多，所以请大家多多赐教！

我们对ＨＢＶ的生活周期应该都很熟悉，包括吸附，穿入，脱衣壳，入核，ｃｃｃＤＮＡ的形成，ＲＮＡ转录，逆转录和ＤＮＡ复制，装配，释放。

把ＨＢＶ基因组转染入ＨｅｐＧ２，ｈｕｈ７等细胞病毒可以复制，并可以产生子代病毒。这说明在直接拿病毒感染的情况下ｃｃｃＤＮＡ的形成，ＲＮＡ转录，逆转录和ＤＮＡ复制，装配，释放这些阶段不存在问题，而问题可能出在前面的过程包括吸附，穿入，脱衣壳，入核。然后我们可以通过设计一些特殊的实验来区分这几个过程，以明确到底是哪个环节出了问题，才导致不能直接感染这些细胞。明确以后是否能够通过改善这些环节以达到建立一个体外感染模型的目的呢？

另外，我们是否可以在ＨＢＶ基因组上随机做很多个突变，然后再建立一个库，再转染细胞，产生的病毒再去感染细胞，然后从中筛选出可能复制的病毒呢。其实ＨＣＶ的感染模型就是这么建立的。

是否可以建立一些原代肝或者胎肝细胞系，或者把胚胎干细胞进行体外诱导，这些细胞能被ＨＢＶ感染吗？

今天就写到这，还有一些想法等改天再写上。

欢迎大家讨论！

作者: hantavirus 时间: 2015-8-21 16:30
davay发表于 2009-7-22 12:21:

然后我们可以通过设计一些特殊的实验来区分这几个过程，以明确到底是哪个环节出了问题，才导致不能直接感染这些细胞。明确以后是否能够通过改善这些环节以达到建立一个体外感染模型的目的呢？

怎么设计特殊实验呢?

原代肝可以被HBV感染的,但是效率不高

作者: hantavirus 时间: 2015-8-21 16:31
yaoming 发表于 2009-7-22 14:05:

回楼上：
由于人原代肝细胞来源困难，所以注定不能成为一个好的感染模型，传说中的HepRG感染模型其实很aitificial，与自然感染有别，否则早就像JFH1，JC1的HCV感染模型一样得到广泛应用了！

设计特殊实验确实很难，我想每设计一个都是一篇JV paper了，也许需要把病毒以不同形式来标记，比如标记core，核酸等，甚至利用其他病毒来辅助感染。

作者: hantavirus 时间: 2015-8-21 16:32
bigben发表于 2009-7-22 17:39:

HepaRG要DMSO促分化大概2周才能被感染吧，有点类似于干细胞的意思

作者: hantavirus 时间: 2015-8-21 16:33
yaoming发表于 2009-7-23 18:58 :

其实对于ＨＣＶｃｃ，病毒也是通过突变才可以感染Ｈｕｈ７.５细胞的，是否我们也可以在ＨＢＶｇｅｎｏｍｅ上引入一些突变来达到同样的目的呢？

我可能会去尝试以下！　

作者: hantavirus 时间: 2015-8-21 16:33
Bigben发表于 2009-8-17 22:12:

To 楼上yaoming
HCV突变之后可以感染机理搞清楚没？为什么？
在HepG2上尝试吗？如果HepG2里面缺少一个或者多个感染需要的蛋白，那就尝试不出来了，HepG2比正常干细胞少不少蛋白的

作者: hantavirus 时间: 2015-8-21 16:34
yaoming发表于 2009-8-18 18:20:

在HCV上做一些突变后可以感染ＨＵＨ７细胞机理基本没有搞清楚。
你的考虑是对的。HepG2比正常肝细胞少不少蛋白的。但是毕竟没有其他更好的细胞。也只是一种尝试，看运气了。

作者: hantavirus 时间: 2015-8-21 16:37
lbllf520发表于 2009-8-19 15:59

To 2楼 davay

原代肝细胞真的转染效率不高吗？我们实验室正在准备分离原代细胞。可否详细点?

现在做HBV方面的研究，的确是缺少有效的细胞模型和动物模型。既然成人肝细胞可以被病毒自然感染，为什么分离出来的细胞系就不能呢?问题既然出在受体（或相关的膜分子）上，可否做mRNA或蛋白组的差异来将这些分子筛选出来呢？

不过我觉得既然大多数情况下的病毒感染和释放都不造成细胞损伤，而肝脏损伤多来自机体自身的免疫应答，我觉得HBV的研究和治愈的转机还是在HBV的感染与宿主免疫系统应答的相互关系上

作者: hantavirus 时间: 2015-8-21 16:38
yao'ming发表于 2009-8-19 18:26:

To 楼上
这是一个很自然的想法，把差异蛋白挑选出来，然后补回去，看病毒是否能感染。其实这方面有人尝试过，就是把cDNA文库导入肝癌细胞株（hepG2)，然后用病毒去感染，好像没有结果。

确实从chisari在动物的研究结果来看，HBV在一般情况下不会杀伤细胞，肝脏的损伤多来自机体自身的免疫应答。

但是要完全清除HBV，也就是自愈乙肝，我觉得一方面必须从HBV的生物学方面着手，只有把HBV复制机理，cccDNA的形成机制搞清楚了，才能设计更加特异，更加有效的药物清除HBV。另外一方面要研究机体对ＨＢＶ的免疫反应，因为对于成年人来说９５％的急性感染都是可以被机体免疫系统清除，所以我们人类本身的免疫系统还是很强大的，把其机制搞清了，我们就可以实施免疫治疗了。

任道重远！

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