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标题: [转移贴]-流感病毒噬斑+++求助 [打印本页]

作者: rojjer 时间: 2015-8-27 16:22
标题: [转移贴]-流感病毒噬斑+++求助
原帖由小朝发表于13/4/2012 01:00

我用MDCK细胞做流感病毒的噬斑纯化，可是中性红染色后，细胞都没有染上色？？
中性红配方：0.2g+100ml超纯水，研磨后过滤并高压，避光4度保存
第二层琼脂配方为 2倍4%血清DMEM培养基：1.6%低熔点琼脂：0.2%中性红=9：9：1（中性红終浓度为1/10000=0.01%）
请高手指点！！！不胜感激！！！

作者: rojjer 时间: 2015-8-27 16:26
lzwangjf：
我一直在做如你所说的实验。。一方面，我做噬斑纯化不染色。看到斑后直接挑。另外，我做噬斑用的病毒维持液和琼脂稀释液是不加血清的，用2% BSA代替，琼脂浓度是1%。。

小朝：不染色怎么挑斑呀？我现在就是细胞染不上色，对照都染不上？？

极乐净土：
2倍4%血清DMEM培养基。-问题可能出在这里。
一般没有多碱性裂解位点的病毒，必须添加TPCK-Trpsin（0.5%终浓度）。所以不能用含有血清的培养基。可以用终浓度0.3% BSA 代替血清。 MDCK很容易培养不需要高营养的。

missann111：
我想请问下不染色怎么挑斑的？因为自己也在做，不染色，肉眼根本看不到斑在哪里，在显微镜下标记，也不能准确标记斑的地点啊

极乐净土：
饰板纯化我没听说过要染色才能挑斑，一般3天左右斑长的很大了，对着光线先在做个标记，然后用tip 头挑就行了。染色一般用结晶紫，活细胞呈蓝色，斑就显示空洞，一般是为了好计数。
楼上的问题是斑长的太小，还是在这里想办法吧。
如果觉得实在不好做，你可以用有限稀释法纯化3代也可以。

饰板纯化我没听说过要染色才能挑斑，一般3天左右斑长的很大了，对着光线先在做个标记，然后用tip 头挑就行了。染色一般用结晶紫，活细胞呈蓝色，斑就显示空洞，一般是为了好计数。
楼上的问题是斑长的太小，还是在这里想办法吧。
如果觉得实在不好做，你可以用有限稀释法纯化3代也可以。

osakaleon：
it is not necessary to stain the gel. I am sure you see the plaqure, if you can not tell me

I will tell you how you can see it

作者: rojjer 时间: 2015-8-27 16:48
lzwangjf:
1. 我做的噬斑很少见到典型的空斑出现，一般最后都是一个坏死点，不知为什么？
2. 此外，噬斑结果如何保存呀？自己做的板子一堆堆的。扔了怕老板那天查原始数据，不扔实在太多。
3. 自己用相机给噬斑照相，但高了很长时间，也没有一张照片是能看清楚的，不知如何给那么多板子一一照相？

半拉木匠:
你们做课题的话板子可以扔，要是做研发项目那是必须妥善保存的。
拍照的话可以一次括上个6块板子，然后在电脑上切割保存。
或者直接用扫描仪扫描。
无论拍照还是扫描都得是取板底也就是离实物最近的地方，标记方向就行了，都拿白纸做好底衬。

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