[转移帖]HCV 展示在细胞表面后WB验证出现多条带怎么解释

hantavirus

原帖由jinlove521发表于 2011-3-29 08:53;


请教一下各位大侠，我在sf9表面展示了hcv 的core蛋白，样品先用裂解液裂解，WB验证时出现多条带大小在21kd，49kd附近，49和90kd之间，特异性都有。请问：这是和转膜时间有关吗？这能用Core的低聚体来解释吗？在变性胶电泳时，低聚体是要解开的吗？谢谢！

hantavirus

yaoming发表于 2011-3-29 10:57；

jinlove521

和你的转膜时间没有关系，与你的抗体有关，可能你的抗体不是很好。另外，不知道你是怎么封闭的？

变性胶低聚体是要解开的，都是单体的。但是一些化学修饰可能保留。

Core蛋白我没有检测过，不能给你直接的经验。

hantavirus

jinlove521发表于 2011-3-29 16:30：

万分感谢版主的赐教。我用的是市购的低脂奶粉加了终浓度是1%的吐温封闭过夜的，抗体用国产的或进口的扎后都有这些条带，也不知道该怎么去解释。

hantavirus

yaoming发表于 2011-3-29 22:33;

to 楼上：
jinlove521


只要在目的大小处有，而对照没有就差不多了。另外你抗体浓度不要太高了，太高了杂带会增多。

还有你可以尝试用BSA封闭，BSA封闭效果可能会好一些。

good luck！

hantavirus

xiaohongsky发表于 2011-4-9 17:28;

core蛋白在HCV病毒颗粒里是四聚体形式存在，lz可以在样品里加5%的β-巯基乙醇煮沸，以排除低聚体的存在，我做core蛋白的检测，21kd很单一