[转移贴]-请问流感病毒细胞实验的阳性药，使用扎那米韦...

rojjer

ufraby 发表于28/10/2011 12:21
刚刚接触病毒学不久，组里希望建立流感病毒筛选模型，不知道有没有前辈是用扎那米韦做阳性药的呢？我看文献好像多为利巴韦林和达非羧酸盐（这个好像很难合成），我也做了几回扎那米韦的实验，结果都不好，好像都抑制不了病毒呢。

看文献，zanamivir对流感病毒的ic50在1nM左右，但我做的大概100nM 才有点儿效。

还想问问，做这种流感病毒的细胞实验的种板密度，是不是很关键呢？我是96孔板，15000个MDCK细胞/孔，24hr后大致密度在70-80%，加药后，加病毒，有时候细胞稀了，好像细胞就都死掉了，细胞要是太密，72hr后对照组细胞，就是只加病毒的组，又有大半的细胞活着，真不知道怎么办了~~

拜请各位大师帮指点指点，谢谢谢谢

rojjer

cloud：
1.首先你的病毒是否是耐药株，如果是扎那米韦的耐药株那应该你多大的剂量对病毒对不会有抑制，季节性H1N1和H3N2病毒对达菲的耐药率已经很高了（记不清，请查阅文献），针对达菲的耐药位点比较明确的位点就是NA-H275Y，所以首先确认你的病毒
2.其次你的MDCK铺板密度可能有点低一般用3*10^4/孔，下午铺，第二天上午80%-90%长满就可以用了，除了某些高致病性的流感病毒，一般病毒培养液中都要加入TPCK-trpsin（多用终浓度2ug/ml)，以及终浓度0.2%的BSA以及PS，HEPES缓冲液。
祝好运！


ufraby：
非常感谢cloud大师~~我真没考虑有可能耐药的问题，非常感谢

我这里的病毒株是H1N1（PR8），不知道一般的这个株耐药不？

我用的无血清DMEM（含PS，TPCK-Trypsin终浓度5ug/ml），细胞长得还好，我就没有补血清或BSA，还有特别想问问，大家用的阳性对照药都是什么？要是可能的话，我想多用几种药尝试下~老出不了结果真着急~

谢谢谢谢~~