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[转移贴]-调查 MDCK 细胞好养么?

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发表于 2015-8-27 16:59:42 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
原帖由liushuichong 发表于18/1/2012 14:24

说实话,我刚接触培养MDCK细胞,个人觉得一点不好养。

我在日本,用的是0.2%EDTA胰酶,37度消化得20分钟,细胞大多抱团,单个的很少。一天后,仍有少量细胞悬浮死掉。

而且,复苏的用cellbanker 冻存的细胞,结果发现细胞内很多黑点,而且形态很瘪,不够饱满。
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 楼主| 发表于 2015-8-27 17:02:15 | 只看该作者
半拉木匠:
消化时间太长了吧?消化之前没用PBS洗吧?  这样消化时间肯定长,笑话效果也不好,吹打的时候细胞又会受伤
复苏前两天那个状态没问题,细胞自己代谢的东西,长几天代谢掉就好了。

tb99:
个人觉得MDCK细胞挺皮实
蛮好养的
我用于消化CK细胞的胰酶是0.5%
消化后吹打几次
3d传一次
镜下立体形态很好

lxj830731:
很好养,也长的很快!

liushuichong:
2# 半拉木匠
我用PBS洗过两次,小细胞瓶加1ml胰酶,我们实验室的细胞就是不好掉下来。通常他们5天一传。
你一般消化多长时间?

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 楼主| 发表于 2015-8-27 17:03:00 | 只看该作者
半拉木匠 :
6# liushuichong
T25的小瓶子么? 加1ml有点少,我们一般为了快都加3ml, 少也得2ml,才能保证充分覆盖浸润。1ml就得不断的摇才行。 我们一般3~5分钟就下来了呀,1:2传代3天就1代, 是不是你们的细胞代次特别的高啊?已经衰老了? 还是培养体系不合适? 你们加多少血清? 消化液是买的上品还是自己配的?EDTA是多少浓度的? 消化完成以后消化液得弃去。

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 楼主| 发表于 2015-8-27 17:05:23 | 只看该作者
119:
还可以,只是不好消化而已!

faywupan:
3# tb99
3天传一次???那是一比几穿的?

belinda2099:
我用的gibco 0.25%的胰酶消化十几分钟感觉就OK了

9# faywupan
它长得不是很慢啊,一传三,10%的南美血清,三天就满了  


hhy1770:
MDCK细胞生长的比较快,所以比例可以适当的放大一些,还有就是细胞已长成单层就传代,等长到致密单层厚就不好消化了
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