[转移贴]肠道病毒标本的采集、运送、保存和实验室检测

cao1976

原贴由ms003发表于 2009-5-20 23:32
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肠道病毒标本的采集、运送、保存和实验室检测

为及时、科学地采集和运送手足口病标本，规范实验室检测程序和检测方法，提高检测质量，特制定本方案。
1 采集对象
1.1 肠道病毒感染者，多表现为手足口病、疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎等，患者多见5岁以下儿童。
1.2 因调查需要的密切接触者。
2 采样液
2.1 pH7.4～7.6 HANK氏平衡盐（含0.5%的牛血清白蛋白）。
2.2 pH7.4～7.6的Eagle’s MEM培养液（含0.5%的牛血清白蛋白）。
3 标本种类及采集
2.1 咽拭子：用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的采样管中。
2.2 手足口病患者疱内渗出液：用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子涂擦疱内渗出液，将拭子头浸入含3ml采样液的采样管中。
2.3 患者粪便：采集5～10g粪便置于15ml空采样管中。
2.4 脑膜炎患者的脑脊液：采集好标本后置于15ml空采样管中。
2.5 心包炎患者的心包积液：采集好标本后置于15ml空采样管中。
2.6 血清标本：须采集急性期、恢复期双份血清。用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静置30分钟，1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于2ml无菌螺口塑料管中。
    标本采集好后，应在采样管上做好标记，并注明标本的种类，同时及时填写采样表，要求信息完整。
4 标本保存及运送
标本应在冷藏的条件下尽快进行送实验室检测，24小时内能检测的标本可置于4℃保存，24小时内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存。如无－70℃保存条件，则于－20℃冰箱暂存。血清可在4℃存放3天、-20℃以下长期保存。标本运送期间应避免反复冻融。
5 标本的实验室检测
5.1 核酸检测：方法包括RT-PCR和Real-Time RT-PCR，首先使用肠道病毒通用引物进行快速筛查，得到阳性结果后使用EV71、CoxA16等引物和探针进行分型。
5.2 病毒分离及鉴定：采用Vero、Hep2和RD细胞进行病毒的分离，第一代7日内仍然为阴性的标本需继续盲传一代。病毒的鉴定采用中和试验（NT）和间接免疫荧光（IFA）法。
5.3 血清学检测：采用组合血清进行血清中和试验，双份血清具4倍增长才具有诊断意义。
6肠道病毒感染病例采样登记表