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[转移贴]-流感病毒噬斑+++求助

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楼主
发表于 2015-8-27 16:22:31 | 只看该作者 回帖奖励 |正序浏览 |阅读模式
原帖由小朝发表于13/4/2012 01:00

我用MDCK细胞做流感病毒的噬斑纯化,可是中性红染色后,细胞都没有染上色??
中性红配方:0.2g+100ml超纯水,研磨后过滤并高压,避光4度保存
第二层琼脂配方为   2倍4%血清DMEM培养基:1.6%低熔点琼脂:0.2%中性红=9:9:1(中性红終浓度为1/10000=0.01%)
请高手指点!!! 不胜感激!!!
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板凳
 楼主| 发表于 2015-8-27 16:48:57 | 只看该作者
lzwangjf:
1. 我做的噬斑很少见到典型的空斑出现,一般最后都是一个坏死点,不知为什么?
2. 此外,噬斑结果如何保存呀?自己做的板子一堆堆的。扔了怕老板那天查原始数据,不扔实在太多。
3. 自己用相机给噬斑照相,但高了很长时间,也没有 一张照片是能看清楚的,不知如何给那么多板子一一照相?  


半拉木匠:
你们做课题的话板子可以扔,要是做研发项目那是必须妥善保存的。
拍照的话可以一次括上个6块板子,然后在电脑上切割保存。
或者直接用扫描仪扫描。
无论拍照还是扫描都得是取板底 也就是离实物最近的地方,标记方向就行了,都拿白纸做好底衬。  

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沙发
 楼主| 发表于 2015-8-27 16:26:05 | 只看该作者
lzwangjf:
我一直在做如你所说的实验。。一方面,我做噬斑纯化不染色。看到斑后直接挑。另外,我做噬斑用的病毒维持液和琼脂稀释液是不加血清的,用2% BSA代替,琼脂浓度是1%。。

小朝:不染色怎么挑斑呀?我现在就是细胞染不上色,对照都染不上??  


极乐净土:
2倍4%血清DMEM培养基。-问题可能出在这里。
一般没有多碱性裂解位点的病毒,必须添加TPCK-Trpsin(0.5%终浓度)。所以不能用含有血清的培养基。可以用终浓度0.3% BSA 代替血清。 MDCK很容易培养不需要高营养的。  

missann111:
我想请问下不染色怎么挑斑的?因为自己也在做,不染色,肉眼根本看不到斑在哪里,在显微镜下标记,也不能准确标记斑的地点啊

极乐净土:
饰板纯化我没听说过要染色才能挑斑,一般3天左右斑长的很大了,对着光线先在做个标记,然后用tip 头挑就行了。染色一般用结晶紫,活细胞呈蓝色,斑就显示空洞,一般是为了好计数。
楼上的问题是斑长的太小,还是在这里想办法吧。
如果觉得实在不好做,你可以用有限稀释法纯化3代也可以。

饰板纯化我没听说过要染色才能挑斑,一般3天左右斑长的很大了,对着光线先在做个标记,然后用tip 头挑就行了。染色一般用结晶紫,活细胞呈蓝色,斑就显示空洞,一般是为了好计数。
楼上的问题是斑长的太小,还是在这里想办法吧。
如果觉得实在不好做,你可以用有限稀释法纯化3代也可以。

osakaleon:
it is not necessary to stain the gel. I am sure you see the plaqure, if you can not tell me

I will tell you how you can see it
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