[转移贴]-求助：MDCK细胞生长问题

rojjer

原帖由wanyang 发表于15/6/2011 04:16
各位好，麻烦帮忙分析一下我的MDCK细胞是什么问题，不甚感激！

培养液是：MEM+1% L -谷氨酰胺+10%胎牛血清+1%双抗
消化用0.25%胰酶—EDTA，37度放~6分钟，然后去除胰酶，再37度放~6分钟，拍打瓶子让细胞都脱落后加培养液。
1：3 传代，隔天传代一次，养了两个星期都没什么问题，可是突然又变成这样了（之前用DMEM养，出现过好多次这样的情况）, 这个细胞我们实验室有好几个人都养，其他人用同样的方法都养的很好，就我的不断出现问题，不知道怎么了。实验室的博后看我操作过，没说有什么做错的地方。

请各位好心帮我看看可能是什么地方出了问题吧，谢谢！！
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rojjer

zhminxiu2010：这个好像消化过度以后出现的情况，我以前也遇到过，后来缩短消化的时间就又变好了，我的也是0.25%的EDTA胰酶，但是消化的时间才37℃ 3~4mins。  


dym1125：
确实是消化时间过长，前后有12分钟了，时间减半看下


wanyang：
可是缩短时间后很多细胞都下不来，怎么办呢？ 我还试过消化6分钟后把消下来的细胞先转到管子里，加培养基终止消化，然后再把瓶子放回37度，继续消化没下来的，可是这样还是不行。请问还有什么办法，既不伤到容易消化下来的细胞，又能把贴得紧的搞下来？谢谢各位。


zhminxiu2010：
我们消化细胞的时候一般是看到小部分细胞脱落后，就加入培养基终止消化，然后用吹管轻轻吹打贴在细胞瓶上的细胞，一般能把大部分细胞吹打下来。  

hhy1770 ：
应该不是消化过头的问题，MDCK细胞对胰酶耐受性很好，曾经消化过30-40分钟，传代后细胞生长的非常好。
你使用的是什么培养瓶，是不是培养瓶的问题 。


zzx219：
MDCK细胞贴壁没有那么紧，我们也是消化三分钟左右，一吹打就下来。估计是你的细胞中污染别的细胞了吧？

wanyang：
问了实验室的博后，他说他的MDCK消化20分钟都没问题。我的细胞是跟他要的，应该也不会有问题才对啊。而且我们用的一样的培养瓶，要是瓶子有问题的话他的也长不好，可是只有我的出问题了。

试过了，有部分顽固的细胞怎么拍怎么吹都下不来。哎~


好像不太可能。实验室有很多其他的细胞，不过我只样这一种。培养基是各人分开用的，瓶子管子都是一次性的。请问还有其他的污染途径吗？



qmk555：
我遇到的问题和楼主类似，经常细胞疯长，然后就很难消化，经常要用枪去刮，疯长几代后细胞状态就不好了，请问这怎么办？细胞长太快了，1:3传代还是很快，一天不到就长满了。。。（是不是因为没有大瓶只能1小瓶传3小瓶有关？）头疼，求解答

119：
你的问题有可能：
没有吹散，细胞连在一起；
消化过了，我一般在显微镜底下看着消化，不放温箱里，这样时间也长不了多少，而且消化的时间易于把握。