[转移贴]-MDCK细胞培养问题汇总

rojjer

zzx219发表于2011

MDCK细胞老是伸出很长很长的突触，像蜘蛛网似的... 请问各位高手们，这是怎么回事？

rojjer

Clair：

细胞在分裂增殖吧


zzx219：

不像是正常分裂那种。改天我上个照片给你看下。

1111.jpg (42.18 KB)

rojjer

douding”
状态不够好。可尝试采用重新复苏或调整培养基血清浓度等手段

盛楠2989：
我养的F81细胞也是这个样子，而且是刚从细胞库买回来传代就是这个样子。
很郁闷啊
为什么呢


virologik：
再传一两代，形态会好很多


wangting0823：

我养的BmN（家蚕卵巢细胞）也是这个形态，正常的本来应该是梭形的，但没有梭的这么厉害，不知道为什么


phoebeyue：

感觉不像是异常的呢！因为MDCK细胞刚开始复苏的时候会成树杈状，但是我发现等到慢慢长满以后就回恢复成圆形

wlxn2007：

这是细胞状态不好的表现吧


bigvetwp：
可能是冻存细胞时细胞受伤了 DMSO加少了
还有可能是血清的缘故 浓度问题



kk7725：
谁有MDCK正常得形态图片？发一下，我发现我养得MDCK也是这样的....拉得贼长


zy020202：
培养基的PH值对吗？

hxq78316：

细胞状态一般吧！


rlover2001：
这样的MDCK我也出现过。是在养了几代后出现的。我感觉可能是因为PH不适，或者细胞状态不好的情况下出现的。


tinyfish：

有可能培养液时间太长了吧！有变质的可能，可以换新鲜培养液试试


一只蜗牛：
细胞老了。
想通过调整血清啊，pH啊，能有稍微改善，但不改变本质。
方法就一个，扔了。
当然，如果要做的实验要求不高，就勉强用用。用完就扔了就行。没有冻存的价值。


kamiao：
我培养过的MDCK也是这样子，而且很难消化，一直都不知道是什么原因

rojjer

xuqz005 发表于31/5/2010 20:11

MDCK 最近一直养不好，一个是颗粒感强，折光性弱，我用的是小牛血清，总觉得细胞状态不好，消化也超难，尤其是培养瓶中间的一片，每次消化20min，消化液也是加了EDTA的，希望MDCK培养高手能指点迷津，谢谢

rojjer

alexpan0804：
用胎牛血清试试.

leceline ：
我也用小牛的，挺好的啊. 我觉得还是细胞本身就不好的缘故，再咋个精心呵护都白费。之前我就出现过这样的情况，后来从新拿了一瓶细胞（从别的实验室），完全就改观了，长得好看也好消化，不过我从来没消你那么长，之前细胞不好也就10分钟，拿了新的回来后有时5min就行了，当然这要跟细胞的汇合度相关

wangfei2002523 ：
我的也是啊，不知道哪儿出问题了！

deepblue：
你的情况极有可能是细胞污染了。建议重新复苏一枝细胞，另外把所有的试剂换新的。

fly天使
呵呵
我们用进口的胰酶消化3分钟就好了
消化前胰酶姚放在37度啊

tjzhjy ：
可能污染了，做个支原体检测。消化时间至多也就十分钟吧，要自己摸索。

dahaia ：
可能还是细胞本省的问题

荷塘：
细胞消化时间太长了，对细胞损伤较大，久而久之会形成恶性循环，细胞的状态也就每况愈下，我们用的是Gibco的edta血清，也就3分钟就消化好了

我们用的是gibco的胎牛血清

bfvirus：
中间会成片，是因为细胞成团块，不是单个细胞长成的，没有长开，这样细胞状态影响也很大，
还有就是血清，血清对细胞的状态影响也很大，最好用进口的胎牛血清；
消化的时间太长了，一般就几分钟就够了，传代就几十秒，细胞快飘起来就赶紧传，原代就几分钟、。


tinyfish:
消化前要用PBS洗干净（洗掉上面的血清），再加trypsin（事先放在37℃预热）进行消化，一般几分钟(5-10min)就好了我们用的是10%FBS

paul09:
细胞难消化主要原因还是细胞状态不好！建议都用商品化的试剂。