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转帖:动物用疫苗不安全因素和解决方法

发布者: 晚风hit | 发布时间: 2015-2-3 14:16| 查看数: 779| 评论数: 1|帖子模式

原帖链接:http://biosky.haotui.com/thread-14158-1-2.html   楼主:fengdream动物用疫苗不安全因素和解决方法
       作者:摘自:金农网日期:2008-05-15
                  不安全因素及解决方法   不安全因素
            外毒素、热源、异体蛋白、内毒素包括革兰氏阴性菌、蛋源、血清和环境。蛋源包括疫苗生产用鸡蛋、SPF鸡蛋(非致病性沙门氏菌、大肠杆菌等污染)、非免疫鸡蛋(鱼粉沙门氏菌污染,定期投入抗生素,减少输卵管炎,蛋壳钙质,畸形蛋)、禽流感疫苗生产用蛋。
              疫苗污染ET后注射动物的临床反应 肿头,肿脸,停食停水,局部炎症,休克,死亡;生产性能降低;免疫功能下降,易发病,对疫苗应答下降。
              细菌内毒素对细胞培养的影响 改变细胞外形;活化细胞产生信息传递物质,井影响其下游生物;途经反应;抑制维生素活性;影响细胞附着力。
              LPS的自发释放:内毒素主要成分是脂多糖(LPS);抗菌药物诱导细菌释放内毒素;抗菌药物诱导LPS释放的动物实验研究;抗菌药物诱导LPS释放的临床研究。
              应用抗生素导致疫苗中内毒素的释放
            庆大霉素、环丙沙星、青霉素、链霉素;兔大肠杆菌性脑膜炎———静脉注射头孢噻啶、氯霉素、庆大霉素,在24小时内脑脊液中内毒素升高2倍~10倍,在临床上兔的死亡是大量使用抗生素的结果,因为抗生素杀死了大肠杆菌,大肠杆菌裂解,释放出大量的内毒素,从而将兔杀死。
              解决方法
              减少原材料和操作的污染;减少动物源性物质的依赖性;改进生产工艺(内毒素的消除):应用抗内毒素的药物,如内毒素抗体、内毒素结合蛋白(高密度脂蛋白)、多黏菌素B和妥布霉素、类脂A结构类似物(E5531);抗细胞因子药物如腺苷类药物氯氨酮等,糖皮质激素类如地塞米松等;抗内毒素的中药,如青蒿素、黄连解毒汤,氨基酸如甘氨酸,乳果糖及胆盐。
              内毒素的消除———物理方法 超滤、石棉及活性炭吸附、离子交换层析、亲和层析(运用抗内毒素抗体)等。   动物疫苗的质量控制
              疫苗生产用毒种、生产用细胞(原代细胞、传代细胞)、疫苗生产工艺、灭活剂、抗生素、血清、佐剂。   疫苗生产用毒种
            原始种子:我国自行分离和从国外引进。建立3批种子批。主种子批和工作种子批:主种子批是指原始种子批扩增而来;工作种子批是指从主种子批扩增而建立,三级种子均须按《中国兽药典》要求检验。
              疫苗生产用细胞
            原代细胞要求:一般1代~5代内,细胞培养用牛血清、胰蛋白酶、培养基等材料应符合《中国生物制品主要原材料质控标准》要求:疫苗生产的每批细胞均应作外源因子检测,细菌、真菌和支原体检查,均应阴性;传代细胞的要求:细胞库的建立:细胞库体系是指每批产品的起始材料具有一致性;细胞库通常为二级管理,由主细胞库和工作细胞库组成;传代细胞传到一定代次后,致瘤性会增强,须进行致瘤性检查和细胞核型分析;细胞的鉴定:细胞鉴别、外源因子污染、致瘤性、细胞核型或染色体检测、外源病毒。
              灭活剂
            福尔马林:其与病毒蛋白的作用初期仅形成羟甲基化合物,其反应是可逆的,但一旦形成交链后则为不可逆的。福尔马林作用蛋白的结果是病毒发生交联作用或是病毒颗粒凝集。同时,这种作用限制了福尔马林作用于核酸的灭活,因此,在某些情况下尽管病毒抗原已遭到了严重破坏,但仍然会有一些病毒存活。
              β-丙内酯优点:直接作用于病毒的DNA或RNA,打断病毒的核酸,使其不能复制遗传物质而起作用,不破坏病毒的外蛋白:β-PL水解成β-羟丙酸(无毒);疫苗中无残留,不影响疫苗的稳定性,灭活作用可靠。
              缺点:β-丙内酯与牛血清白蛋白的结合引起过敏反应。研究发现:接种这种疫苗而导致抗牛白蛋白lgE的产生的原因是由于β-丙内酯与疫苗中的牛白蛋白结合,使这种β-丙内酯—牛白蛋白的结合物变形,从而使疫苗接种动物产生抗牛白蛋白lgE,出现过敏反应。
              抗生素
            国外最多应用的是新霉素,国内均用青链霉素,庆大霉素和卡那霉素。临床上新霉素常用于外用,而青霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素常用于肌肉和静脉注射;抗生素只能用在细胞制备阶段。国内企业多个生产步骤均添加抗生素,致使疫苗中抗生素含量较高,是导致疫苗不良反应原因之一;疫苗中使用新霉素引起的过敏反应的风险要小于青霉素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素。
              动物血清引起的问题
            不需要的细胞、细菌、支原体过量生长;补体、免疫球蛋白、生长抑制因子等有害物质成分不明确,影响结果分析;探测、下游处理和纯化;微量遗留蛋白抗原性;中和抗体引起收率降低;突发污染支原体、病毒和朊病毒;诱导分化;不同批号有区别;地域、季节和个体区别;不确定因素多;价格昂贵等。
              传代细胞培养注意的几个问题   前期工作
            细胞瓶的新转瓶处理不到位,玻璃中的二氧化硅释放过多,对细胞有损伤;冲洗转瓶的最后一步应用去离子水,而不是注射用水;瓶子刷洗不过关;洗衣粉或洗涤剂残留;细胞瓶塞如用再生橡胶塞对细胞有毒性,建议使用硅胶塞;管道系统中细胞瓶塞上的管道使用所谓“不锈钢”管道对细胞有毒性,建议使用玻璃制成的管道,同时更换硅胶管。
              营养液成分
            水:注射用水应通过阴阳离子交换柱处理,经电导率仪检测;基础培养基来源:进口产品质量比较稳定可靠,国产产品批次间质量不稳定;基础培养基引起细胞凋亡。血清:过滤、钴60照射除菌。内毒素含量都很高,前者常常灭菌不彻底,后者可解决支原体污染,但照射剂量大易破坏生长因子等影响细胞贴壁。从节约成本角度考虑,建议采用碳酸氢钠即可满足生产要求。
            中国兽医药品监察所研究员王栋

最新评论

sulin534 发表于 2018-10-11 11:21:15
非常实用谢谢

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