[转移贴] 求教犬瘟热病毒纯化

hantavirus

原贴由cherry_ren 发表于 2009-10-11 22:31

我想请教一下大家，犬瘟热病毒纯化时，使用密度梯度离心法，具体如何进行呢？离心后取哪一层呢？离心之前我还需做什么处理吗？谢谢各位~

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半拉木匠发表于 2009-10-11 22:58 |：

蔗糖密度离心方法随便网上一搜就有， 具体收集哪一层  全收然后分别电泳SDS鉴别  如果没参考品那就做WB------要有抗体：多抗、单抗都行、自己挂HRP或AP。
    离心前做切向流浓缩，如果不是为收集全病毒就先做个破碎：超声、匀质、裂解等等。
这就是主要思路，具体步骤操作文献就不用给了吧？？随便上网一搜就有

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cherry_ren发表于 2009-10-14 14:16 ：

谢谢指点~还有一个问题，离心前是必须要浓缩吗？我们实验室没有切向流系统，还有什么浓缩的方法呢？谢谢

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半拉木匠发表于 2009-10-16 22:30

3# cherry_ren


保持病毒活性的话最好还是做切向流啊。
要是单纯蛋白 或者死病毒浓缩的话 可以使用半透膜加PEG   半透膜就是实验室里的透析袋 PEG2000就行

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cherry_ren 发表于 2009-10-17 21:40 :

半拉木匠 ，谢谢你~
我们实验室没有切向流系统，还有别的办法吗？我要保持病毒的活性，因为还要做攻毒试验。
谢谢指点

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半拉木匠 发表于 2009-10-17 22:30 :

你的病毒应该是胞外病毒吧  那说实话为保证质量最好是买切向流啊。  应该不是很贵 买体积最小那个。
要是实在实现不了 那不做也行，因为离心收获本身就是个浓缩的过程，上样体积尽量大，收获体积尽量小，
不敢定论，但是浓度高些稳定性会好些是基本道理。 不同的病毒、蛋白有离心前浓缩也有离心后浓缩的。
如果实在想离心建议做一些试验：
1、该病毒对温度是否敏感？
2、如果不存在热敏尝试透析袋+PEG法？
3、病毒收获液活性究竟有多高？能否采用直接离心浓缩而不做切向流？
4、是不是只能攻毒小鼠TCID50检测活性？？没有其他检测办法？无敏感细胞？