[转移贴]找HBV receptor的问题

cao1976

原贴由kinglemon 发表于 2009-6-4 14:27 :

在肝炎病毒版发了 这里人气更旺 看看大牛们能不能给点意见哈

俺其实是学neuroscience的 最近几个月才对HBV产生了些兴趣 于是读了些文献 发现大家众口一词的认为找不到HBV receptor是这个领域发展比较慢的主要原因：因为不知道到receptor 就没办法建立能够被HBV感染的细胞系（反过来说也成立：因为没有乙肝易感的细胞系 没法很容易的screen for receptor）。俺于是有些兴趣想想怎么做这个问题 在这儿讨论讨论可能的实验设计 行内的牛人们帮忙指点哈 也算抛砖引玉了哈

过去大家找HBV receptor的方法 一般是screen和HBV surface antigen(主要是preS1 也有用别的)binding的蛋白 用的library有HepG2细胞系 也有用人肝细胞的 （插句话 按说用HepG2表达的蛋白做screen很不靠谱的样子 因为HepG2本身压根就不会被HBV侵染 为什么这样的实验也能发表呢？奇怪） 找到的binding protein不少 按理说下一步应该看看这些protein是不是necessary and sufficient for HBV entry了 比如说RNAi knockdown这个基因 或者把这个蛋白表达在HepG2或者无关的cell line里观察HBV entry情况。可是哪怕是最基本的necessity test我看到的都不多 最多的方法是用这个binding protein的抗体看能不能阻止HBV感染 这应该说是个很间接很没有说服力的检验（即便此蛋白不直接参与HBV entry而是间接的参与某些一般的内吞机制之类 block它的功能多半也会阻止乙肝入侵）

按说还是有比较直接地方法来找HBV receptor的 比如说啊

1> 直接在HepG2 cell line转染人肝细胞cDNA文库 然后用HBV侵染筛选表达HBsAg的细胞（当然还有更方便的方法 不多说了） 从而得到HBV receptor; 2> 直接用质谱比较人原代肝细胞和HepG2 cell line的表面蛋白 找出差异表达的蛋白（原代细胞有cell line没有）看哪些蛋白可能会参与HBV entry（还是上面说的检验方法); 3> 或者还是质谱 但是只比较 新鲜的人原代细胞和培养一段时间的细胞（后者感染性大大下降？） 其他思路类似；等等。。。

当然这些方法也有问题 比如说1>方法 如果HBV receptor需要超过1个蛋白 类似的screen很可能得不到结果 因为类似的转染方法基本只能保证1 copy/cell 不过这种问题也有解决方法就是了。

昨天和这儿的朋友聊了会儿 至少知道某些思路比如1>其实他们或者其他人确实是在做了 那么其他的思路呢？或者还有什么更好的方法呢？而这些方法又有什么样的问题呢？如果至少看不出什么明显的漏洞的话 又是什么因素使得HBV receptor至今都还没有线索呢？

PS 美国做HBV的人相当少 做HIV,HCV,Influenza甚至SARS的都相当多 而且相对来说牛人要多得多 我感觉一个原因是美国HBV的危害要小得多 而且美国有做逆转录和RNA病毒的传统（我个人觉得主要是David Baltimore这个老大的影响） 我不知道这个现状能不能部分的解释为什么HBV的进展要慢得多