[转移帖]关于整合了GFP-HBx的慢病毒pll3.7感染HepG2后单克隆的筛选

cao1976

原帖由happy2392发表于 2010-5-24 20:32 :

各位同仁好，本人在做慢病毒感染后挑选带有GFP的单克隆实验，尽管有单克隆扩增的细胞团，但是，在挑取时遇到了很多不顺情况，每次挑取后会有杂细胞纠缠着目的细胞，带GFP的细胞一直得不到纯化。挑取方法：在荧光显微镜下画圈圈，不知哪位高手有做过类似实验？有没有一种更好的方法去挑带有GFP的单克隆？请赐教哦，非常感谢！

cao1976

wwwkkk83 发表于 2010-5-24 21:07:

采用96孔板有限稀释法进行单克隆细胞的筛选

cao1976

ayeqiu发表于 2010-12-21 13:23

本人也尝试过了，在96孔板里面虽然能得到单个的带荧光细胞，但是长了两个星期还是长不起来，最后直接死掉了！

cao1976

xray19发表于 2010-12-25 12:26

用HepG2筛选细胞克隆，如果有人用96孔有限稀释法，那么此人很有可能是没养过HepG2，甚至没做过克隆筛选。因为大多数细胞在密度较低情况下，是很难长起来的。
你可以用逐步富集法，但花费时间较长。基本步骤与你在显微镜下划圈然后挑取克隆相同，多次进行铺种-挑克隆进行纯化。

而事实上做功能试验，不需要100%克隆纯化，80%即可。你可以在纯化克隆同时，做HBx的功能试验了。
老板让你做筛选，基本上就确定了你是铺路石，打基础的了，筛出克隆也是为以后的工作准备的，而不是你。