噬菌体效价测定法

cao1976

BIOX.CN  2005-5-15 15:27:44 来源：生命经纬  


　

一. 点滴法

1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时。

2. 取300 μl 寄主细菌悬浮液加入5 ml 冷却至45℃的0.7﹪琼脂培养基中，均匀混合后立即平铺于已凝固的1.8﹪琼脂培养基上，并静置30分钟以上使其凝固。

3. 以1% peptone为稀释液，将噬菌体原液做10倍序列稀释，一般稀释至107倍即可。

4. 将平板划分为八个区域，以pipetman取不同稀释倍数之噬菌体稀释液各 1 μl，分别接种于不同的区域上。

5. 将平板置于适合的温度下，一般培养8~24小时，待溶菌斑产生后观察并计算其数目。一般噬菌体浓度太高的区域会融合成一个大的溶菌斑，而浓度适中的区域会形成肉眼可观察的溶菌斑。

6. 噬菌体效价 (pfu/ml)＝溶菌斑数×稀释倍数×取样量折算数

例如：噬菌体原液稀释倍数为106，取样测定量为0.001 ml (则取样量折算数为1000)，三个滴定点的溶菌斑数目分别为15、18、16，则噬菌体原液的效价为：

1/3(15+18+16)×106×1000＝1.63×1010 (pfu/ml)



二. 双层琼脂培养法

1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时。

2. 以1% peptone为稀释液，将噬菌体原液做10倍序列稀释，一般稀释至107倍即可。

3. 取噬菌体稀释液100 μl 与寄主菌液300 μl均匀混合，静置15分钟使其感染。

4. 将上述混合液加入5 ml 冷却至45℃的0.7﹪琼脂培养基中，均匀混合后立即平铺于已凝固的1.8﹪琼脂培养基上。

5. 将平板置于适合的温度下，一般培养8~24小时，待溶菌斑产生后观察并计算其数目。

6. 噬菌体效价 (pfu/ml)＝溶菌斑数 ×稀释倍数 ×取样量折算数

例如：噬菌体原液稀释倍数为107，取样量测定量为 0.1ml (则取样量折算数为10)，三个平板的溶菌斑数目分别为275、252、263，则噬菌体原液的效价为：

1/3(275+252+263)×107×10＝2.63×1010 (pfu/ml)