培养过PK-15细胞的前辈请进！！

序道

各位前辈们：
    我最近准备用PK-15细胞培养病毒，可对于养细胞一片空白。对于细胞培养的条件，环境，以及细胞培养用到哪些试剂器材等等一律感到陌生，希望能得到各位前辈的帮助，不胜感激。如果能提供相关文献的话就最好了。我找了很久，可是没找着，谢谢！！！




















原帖链接：http://biosky.haotui.com/thread-13908-1-2.html
楼主：demonsboy

序道

这个细胞很好养的，就是一般的 条件就行了，国产血清10%的DMEM营养液，细胞传代需要胰酶消化，一般都是用5%的CO2的培养箱内培养，先试下，操作一次后，下次操作就容易多了，必要再找资料了，你实践一次就知道所有的问题了，第二次就可以操作好了



4#shuxilou888

序道

先准备培养细胞的一些器材吧~~比如有：5ml和10ml移液管（21cm左右）、直吹管、弯头吹管、10ml离心管、冻存管(1.8-2.0ml)、锡箔纸、铝制饭盒（装管子用）、铝制烤箱、T75、T50、T25等型号细胞瓶、培养皿、电动移液枪（可以用洗耳球替代）、250ml和500ml瓶子、酸缸（清洁液缸，用厚的塑料桶装就）、稀盐酸缸等等。当然还要有CO2培养箱、倒置显微镜等等。具体可以再查一下坛子里的帖子。

PK细胞还是挺好养的，半年前开始养细胞，就是养PK的。我们实验室用的是HYCLONE的DMEM，加2%-5%四季青小牛血清就可以了。状态好的话长得超快。同瓶1：5传代一般都不用换液了，呵呵，不知道是不是长得太快的缘故。因为只是用来练习，也没在意那么多。消化用0.05%胰酶，消化时间看具体情况，我们的细胞要消化2min-2min15s这样，再多30s就漂了。~~

欢迎多来坛子里交流~~

7#kousyouki

序道

我用的是胎牛血清，10%血清的DMEM作为生长液，5%血清DMEM作为维持液。消化才2分钟啊？看来你当时的细胞状态不是很好，我用0.05%的胰酶消化在8分钟左右，三天换液，四天传代.我已经养了一年半了，细胞状态非常稳定。

10#ccty0033

序道

PK-15细胞比较容易养。
用具：细胞瓶、瓶塞、吸管、吸头、CO2培养箱、倒置显微镜。
试剂：含10%牛血清的MEM培养液
营养液配方：（10%）牛血清+(90%)MEM+(1%)双抗+1-(2%)7.5%碳酸氢钠
维持液配方：（2%）牛血清+(90%)MEM+(1%)双抗+1-(2%)7.5%碳酸氢钠
配0.25%胰消化酶，备用。
消化细胞时，用量不用太多。大概用量是营养液总量的1%左右。消化时间具体情况而定。我们可以观察细胞形态变化以及消化时间2min-3min。
传代比例按照细胞计数进行。一般1：3进行传代。

13#yuhong

序道

恩，建议还是不用0.25%的胰酶，我养了很长时间，发现0.25%的胰酶消化的细胞成团率很高，而且当细胞的状态稍有改变，消化的时间就会变化非常大。所以，还是建议使用0.05%的胰酶进行消化，消化的时间在7-9分钟这样，低浓度的胰酶对细胞的损失也比较小。而，现在DMEM的使用已经比较的普遍，配制也相对简单很多，因此，有条件的话建议还是使用的DMEM。再则，建议不在培养液中添加，虽然这样可以减少实验中的污染概率，但个人感觉不利于提高你的培养技术，而且加双抗的培养液有的实验不能用，比如脂质体转染的时候，就不太好。


14#ccty0033