【转移帖】 HBV在细胞系中的表达

cao1976

原帖由emma0802发表于 2010-6-20 20:39：

身为小白的我有很多困惑，可能是一些很基础的知识，所以人家文献也好，教材也好都懒得说了，只好在这里请教各位大侠。
    我们知道，在HepRG出现前的细胞系都不能天然感染HBV,要想检测HBV的特性，只有将其基因转入细胞系内，一般有两种方法，一是线性直接转入，另外一种是作成1.1,1.2,1.3倍体结合到表达质粒上，然后再转入细胞系中。但是我一直不明白为什么非要作成加长的DNA，加长的是哪一部分。我们师姐作了一个全长的，也能正常表达抗原，并能检测到dna复制，但是我们无法解释这个事情。

cao1976

bigen发表于 2010-6-21 12:42 ：

因为HBV的基因组很紧凑，几个蛋白ORF的区域有重复
一倍体病毒全长应该是检测不到dna复制的，除非那是质粒的复制，不是整合到细胞基因组上面的  

cao1976

xray19发表于 2010-6-23 18:58：

一倍体全长在两端加有Sap1酶切位点，转入细胞后可自身环化成闭环病毒DNA，不知道楼主师姐是不是采用的这个策略。

cao1976

emma0802发表于 2010-6-24 13:40 ：

不是的  用了pcdna3.1载体的

cao1976

xray19 发表于 2010-6-24 18:51

有辅助载体吗？仅仅是单倍体HBV构建人3.1载体吗？这怎么会有病毒复制呢？能否详细问下你师姐，给大家解释下