腺病毒载体操作手册中文版
腺病毒重组系统
AdEasyTM操作手册
目 录
第一章 简介
第二章 应用重组腺病毒的优点
第三章 AdEasyTM 技术
3.1 技术概况
3.2 AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程
第四章 主要流程
4.1 将基因克隆入AdEasyTM转移载体
4.1.1克隆的一般原则
4.1.2构建重组AdEasyTM转移载体
4.2 细菌内AdEasyTM重组子的产生
4.2.1共转化的一般原则
4.2.2共转化方法
4.2.3预期结果
4.3 AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增
4.4 AdEasyTM重组子转染QBI-293A细胞
4.4.1细胞铺板
4.4.2磷酸钙转化技术
第五章 常用技术
5.1 QBI-293A细胞培养
5.1.1QBI-293A细胞的初始培养
5.1.2QBI-293A细胞的维持培养和增殖
5.1.3QBI-293A细胞的冻存
5.2 QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生
5.2.1感染QBI-293A细胞
5.2.2病毒空斑形成
5.2.3琼脂糖覆盖被感染细胞
5.3 MOI测定
5.4 腺病毒感染力测定
5.4.1X-Gal染色
5.5 重组腺病毒的筛选和纯化
5.5.1挑选最佳重组腺病毒：表达和基因输送
5.5.2病毒空斑挑选和小量扩增
5.5.3Western杂交
5.5.4Southern杂交和点杂交
5.5.5病毒裂解产物
5.5.6免疫测定
5.5.7功能测定
5.6 病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增
5.7 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒
5.7.1不连续密度梯度离心
5.7.2连续密度梯度离心
5.7.3病毒溶液去盐和浓集
5.8 病毒滴度测定
5.8.1O.D.260 nm (VP/ml)
5.8.2空斑测定法
5.8.3 50%组织培养感染剂量法
第六章 疑难解答
6.1 QBI-293A细胞培养
6.2 感染力测定
6.3 转移载体克隆
6.4 在BJ5183细胞中共转化和重组
6.5 转染QBI-293A细胞
6.6 筛选和测定
6.7 在QBI-293A细胞中表达
6.8 重组腺病毒的扩增
6.9 纯化
6.10 病毒滴度测定
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发表于 2016-9-26 15:40:45
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发表于 2016-12-1 19:35:18
发表于 2016-9-27 07:16:02
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