利用GFP来筛选互作蛋白的方法讨论

donggua

现在已经有多种方法来筛选互作蛋白，其中一个方法是将标签融合到目标蛋白中。而用的比较多的标签之一就是GFP，那么问题来了，在融合之后，筛选互作带白的时候，我们应该注意些什么东西呢？请大家一起来讨论下。。。。

序道

用标签做对照？

donggua

有几个问题
1、在筛选的时候应该添加什么样的对照？
2、如何减少在筛选过程中的非特异性互作？

donggua

序道 发表于 2016-12-11 10:49
用标签做对照？

是的。例如如果用gfp作为标签的话，一般用gfp标签蛋白作为阴性对照。

donggua

还有一一个现象，我们在实际筛选互作蛋白的过程中，标签蛋白自身也会存在一些潜在的互作蛋白，通过阴性对照我们可以排除这部分。当然，也有标签蛋白与诱饵蛋白都与某种蛋白互作的可能。。。