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[互帮互助] 水痘病毒Ellen株(ATCC VR-1367)的复苏、冻存

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病毒学院小学生

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发表于 2016-8-16 12:46:55 | 显示全部楼层 |阅读模式
实验室新购买了水痘病毒Ellen株(ATCC VR-1367),但是说明说给的很简略,之前也没操作过,所以想请教高手。不胜感激!!!
1、打算用MRC-5细胞复苏,复苏时接菌量怎么定呢?
当细胞单层后(25平方厘米的培养瓶),倒掉培养液,用1*PBS洗涤细胞面,然后将病毒(1ml)加入到培养瓶,吸附,再加入10ml的维持液进行培养。这么操作对么?

如果病毒是冻干粉,要用什么液体进行复溶呢?

2、收毒后进行冻存,想用两种方法,有细胞悬液和无细胞悬液两种方法。因为下一步想用病毒免疫动物,以获得血清,那么加入何种保护剂不影响毒力呢?保护剂的比例(最终比例)是多少?两种冻存的方法加入的保护剂可以相同么?
   冻存时需要梯度降温么?我们打算-80度或者液氮冻存
   
   冻存液用什么呢?

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病毒学院小学生

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发表于 2016-8-24 14:20:47 | 显示全部楼层
冻干粉复溶一般都应该是注射用水,
收毒后,加10%血清和蔗糖,直接冻-70℃就行。
收毒后的病毒液可以用移液管吸入离心管,在1000-2000转下离心5-10mins,以此除去细胞碎片,将离心后的上清夜转移,弃底部沉淀,该上清液即为无细胞病毒液。
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