水痘病毒Ellen株(ATCC VR-1367)的复苏、冻存

yddwl

实验室新购买了水痘病毒Ellen株(ATCC VR-1367)，但是说明说给的很简略，之前也没操作过，所以想请教高手。不胜感激！！！
1、打算用MRC-5细胞复苏，复苏时接菌量怎么定呢？
当细胞单层后（25平方厘米的培养瓶），倒掉培养液，用1*PBS洗涤细胞面，然后将病毒（1ml）加入到培养瓶，吸附，再加入10ml的维持液进行培养。这么操作对么？

如果病毒是冻干粉，要用什么液体进行复溶呢？

2、收毒后进行冻存，想用两种方法，有细胞悬液和无细胞悬液两种方法。因为下一步想用病毒免疫动物，以获得血清，那么加入何种保护剂不影响毒力呢？保护剂的比例（最终比例）是多少？两种冻存的方法加入的保护剂可以相同么？
   冻存时需要梯度降温么？我们打算-80度或者液氮冻存
   
   冻存液用什么呢？

penghaoxue

冻干粉复溶一般都应该是注射用水，
收毒后，加10%血清和蔗糖，直接冻-70℃就行。
收毒后的病毒液可以用移液管吸入离心管,在1000-2000转下离心5-10mins,以此除去细胞碎片,将离心后的上清夜转移,弃底部沉淀,该上清液即为无细胞病毒液。