293细胞培养心得【ZT】

cao1976 · 发表于 2017-3-27 16:54:05

转自丁香园，作者SyCellCulture

接触293也有半年了，从开始的养不活到现在的成熟，我也蜕变了。 293，贴壁不牢，换液，pbs洗不能有太大的动作，我感觉这个细胞不怕挤，但是密度太小的话长的就很慢。
好吧，第一次总结，语言组织的太烂，别介意，学经验就好。
复苏：正常复苏，跟其他细胞一样，简单的就不说了，离心之后看细胞量，根据细胞量铺板子（这里我用的是6wp，本人不喜欢用瓶，实验需要大量的细胞直接用大皿）293细胞稍小一些，找好感觉。（一般冻存是2/6或3/6冻一管，复苏就放2/6就行），以2/6为例：刚复苏的293状态特别不好，一团一团的，一副要死的样子，不用担心，每天看一下，长满再传！如果细胞团太大的话细胞量还是不太多就单传就是2/6传2/6，一定等长满再传。
传代：刚来的时候用的是MEM培养基，天性吧，我太懒了，养了好几种细胞都是DMEM（10%FBS），然后293夜跟着用DMEM了（感觉没啥变化）也是直接捞干的来！什么吸弃培养基pbs洗都差不多，就是温柔点。重要的是消化，6wp每孔0.5ml胰酶，（正常的胰酶就行，没太大要求），轻轻晃匀，让细胞都沾上胰酶，然后直接吸出来（贴壁不牢不用等时间，否则细胞都脱落了就该离心了。。懒病）静置10~30s，培养基重悬1:2传代，吹匀，铺板。
也尝试过不用胰酶消化，也可以，就是感觉吹不太开，细胞有聚团的，太用力对细胞伤害太大了。。

1:2传代，第二天就不用动，隔一天一传，也比较好掌握时间。感觉就刚复苏时娇气点长起来就容易养了，希望大家用心对待细胞，养细胞就像养孩子一样，该温柔就温柔，不听话也别惯着！掌握好度，不要被细胞牵着鼻子走，你才是他的daddy！