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原贴由wwwkkk83发表于 2009-9-23 16:39

生物工程学报 25 August 2009, 25(8):1267～1272

链球菌噬菌体裂解酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性检测

陈蔚青1, 王晓枫2, 王普2, 张德勇1, 陈虹1, 柯薇1, 陆胤1, 张建芬1

1 浙江树人大学生物与环境工程学院, 杭州 310015

2 浙江工业大学药学院, 杭州 310032

摘  要: 噬菌体裂解酶是噬菌体产生的细胞壁水解酶, 通过水解宿主菌细胞壁使子代噬菌体释放, 在体外能高效且特异性地杀死细菌。本研究旨在克隆和表达链球菌噬菌体裂解酶PlyC, 并测定其生物学活性。利用PCR方法扩增PlyC的2条肽链PlyCA和PlyCB, 构建表达载体pET-32a(+)-PlyCA和pET-32a(+)-PlyCB, 分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中, 以0.7 mmol/L IPTG在30 oC诱导7 h实现了高效表达, SDS-PAGE分析表明PlyCA和PlyCB表达量均可达菌体总蛋白的30%以上。采用Ni2+-NTA亲和层析法纯化目的蛋白, 其纯度大于95%。用透析复性方法得到目的产物重组链球菌噬菌体裂解酶PlyC, 以浊度法和平板计数法检测其体外抗菌效果, 扫描电子显微镜观察裂解酶作用前后细菌细胞形态变化。结果表明重组PlyC能特异性裂解化脓性链球菌(A组 -溶血性链球菌), 以4  g/mL浓度作用于OD600为0.56的菌液60 min后杀菌率达99.6%, 扫描电镜观察结果显示该酶作用于菌体后, 链球菌细胞裂解, 呈碎片状态。本研究为开发一种新型、高效的链球菌感染疾病治疗药物打下了基础。

关键词: 噬菌体裂解酶, 链球菌, 表达, 纯化, 活性

Expression, purification and characterization of bacteriophage lysin of Streptococcus in Escherichia coli

Weiqing Chen1, Xiaofeng Wang2, Pu Wang2, Deyong Zhang1, Hong Chen1, Wei Ke1, Yin Lu1,and Jianfen Zhang1

详见：http://www.bioon.com/biology/Microbiology/408085.shtml