问一下，各位收了baculovirus后都用0.22微米的滤膜过滤吗？

cao1976

原贴joybby 发表于 2011-1-11 23:25
http://biosky.haotui.com/thread-19620-1-5.html

问一下，各位收了baculovirus后都用0.22微米的滤膜过滤吗？最近发现上个月扩增的病毒用来感染居然没有做种的好(先用做种的病毒摸了一下最适MOI，确定了MOI之后，用扩增后的病毒做了大规模表达，但是这次蛋白表达却很少，并且大部分在胞内，几乎没有分泌，而之前用做种的病毒试表达时，蛋白表达很不错)，想来想去只可能是以下两个原因：
1. 细胞状态没有上次好？（可能性不大，上次转染是大概是94%存活率，这次是92%，差别并不大）
2. 扩增后的病毒过滤过（做种的只spin过），可能过滤时吸附了很多，病毒的滴度下降很多。（这好好像也不大可能，我测过滴度，扩增后pfu有200million, 并且手册上是推荐过滤的，而virus我查了一下，是60nm*400nm的大小，如果竖着是可以通过滤膜的）
有点confuse, 所以上来请教一下。

cao1976

一般离心取上清即可，不需要过滤