Sf9 cell的培养问题

cao1976

原贴由roredia 发表于 2009-10-25 13:42
http://biosky.haotui.com/thread-12456-1-4.html

最近,我在培养SF9细胞.因为以前没有养过,所以现在有些问题想请教一下大家!
           起初和别人要这个细胞时,别人是悬浮培养的....我拿过来就直接用贴壁培养的方法进行培养,开始时细胞长得并不好,贴壁贴得很不紧,而且能贴上的细胞也少!开始时成簇地生长,所以我把上清倒掉,把贴壁的细胞继续培养,现在有两瓶长得还可以!但是我却发现一个问题,长满单层的细胞,很难吹打下来.现在我担心的有以下几方面:
          1.因为难从壁上吹打下来,所以上下吹打的次数很多,会不会因为这种机械作用力导致细胞活力降低?有没有什么方法可以把细胞能更好地从壁上吹打下来呢?
          2.因为我是用无血清培养基培养的细胞,所以没有考虑用胰酶消化
     3.我看资料里说一般72小时传代一次,可是我的细胞三天时单层还没长满(可能和开始时的细胞数少有关系),但是四或五天时,细胞单层还没办法形成,但是培养基里悬浮的细胞却挺多的.请问还有没有什么改进的培养方法呢?

cao1976

stare024 发表于 2009-10-25 14:26 ： 细胞上下的吹打肯定会对细胞造成机械性的伤害的，这是不可避免的，但是可以根据自己吹打的力度掌握一个平衡点，既能把较多的细胞吹下来，又使得对细胞的伤害到最小，既不能太用力又不能用力过小，这个得靠自己把握。胰酶消化好像对昆虫细胞来说不太合适，我也曾经想过用胰酶，但老师不让我用，说对昆虫细胞有影响。
    不知道你用的什么样的培养基，是TC100还是Crace’s或其他，我在网上看到过一句话不知道对不对：“无血清的培养基多是为悬浮培养设计的”，不知道楼主为什么用无血清的培养基来培养贴壁的sf9细胞。
    你提到，要的细胞原来事悬浮培养的，现在你改为贴壁培养， 不过个人觉得你把人家悬浮培养的细胞拿来贴壁培养好像不太合适，另外细胞状态不好跟培养基有很大的关系。我这里都是用10%的血清的TC100培养基培养贴壁细胞，长的很快，基本上分下来细胞2--3天可以长到单层，有时候一天就可以长成单层。
个人认为，你还是再通过某些渠道，直接拿别人贴壁的细胞来培养。

cao1976

qhg发表于 2009-10-25 21:16 ：无血清的培养基是可以静止培养SF9细胞的，我们实验养的挺好的。还有细胞吹打不掉，可以用细胞刮子将细胞刮下来

秦白 发表于 2009-10-28 22:32 ：在没有血清的情况下培养，Sf9细胞长得比较慢，建议加上血清培养将细胞状态调整好。按照protocal，可在转染前用无血清培养基洗涤细胞。Sf9细胞在状态好的时候，大约3-4天可传代一次，如果不是对细胞要求特别严格，可以用吸管、甚至移液器吹打。吹打下来的细胞还可在更换后的培养瓶或皿中静止吸附约10分钟，除去上清后更换新鲜培养基，将会得到较好的细胞。 血清最好是胎牛血清。对血清的要求还是比较高的，同样是进口的，可能培养的细胞状态差异也会很大，在国内许多代理的血清不是很好，如果不知道哪个厂家好的话，只有多试几种。我们实验室是从HK买的。

lvpeng1208 发表于 2011-3-17 00:37 ：最好用自己的培养基重新复苏，或者逐渐替换掉原来培养基

xichen09 发表于 2011-10-18 10:07 ：最近要做SF9的细胞培养，看了各位的留言，似乎这个细胞的培养基有好几种，能请教一下各位这些培养基各是什么用途的么？还有就是无血清和有血清的培养基用途是什么？非常感谢