病毒灭活液的灭检问题

序道

做猪的蓝耳病病毒灭活液的灭活检验，因为甲醛的问题，细胞在灭活液接后脱落比较厉害，有没有好一点的建议。




楼主：mianyiyi
原帖链接：http://biosky.haotui.com/thread-13645-1-1.html

序道

可否把现象说的再详细些？  如何确定就是甲醛而不是其他因素造成的？如果确实已经证明是甲醛问题那就摸索甲醛浓度灭活时间灭活温度等等 或者干脆换灭活剂（结晶紫、β丙内酯等等等等  ）


2#半拉木匠

序道

楼主的要表达的是在做灭活验证时因甲醛的影响而难以进行细胞接种？首先像木匠所说，确定是否因甲醛造成的，同时也就是做甲醛的量低至多少对你的细胞生长没有影响？把灭活液内含有的甲醛去除，可以通过透析的办法去除，再就是加入亚硫酸氢钠中和甲醛作用（这个多用来做终止甲醛的灭活作用）


3#pipi302

序道

呵呵，首先谢谢两位版主的回答。
    我的意思是，病毒是用甲醛灭活的，在检验灭活效果，也就是是否灭活完全时，规程要求是取稀释10倍的灭活病毒液，接到易感的细胞上，观察5日后再盲传一代，传5日后，如果细胞能正常长起来并维持，则可以判定灭活完全。
    现在问题是，病毒如果接到细胞上一般能观察到病变都是在48小时以后，但接灭活液后，因为甲醛的关系，不到24小时细胞就会有相当程度的脱落，也就是说，细胞一般撑不到病毒来感染它。
    我提的问题是，有没有办法处理一下病毒灭活液，将其内的甲醛处理掉，让细胞多支撑几天。
    因为是实际生产，所以，灭活的方法不好改。


4#mianyiyi

序道

      客气了  
客观的说一说实验的事噢 不是怀疑您
既然是生产规程上的做法  那也就是说经过验证的  或者最起码成功的完成过并且重复性良好的  那么我是不是可以怀疑是本次实验中出现了什么没察觉到得问题导致该实验无法重复了 这边有过类似的经历但是并不是甲醛的影响 而是实验操作造成的细胞死亡 一般使用甲醛的常规灭活浓度的话应该不会产生这种影响的 早期的好多灭活苗工艺都是甲醛 这是其一
其二就是关于甲醛的去除 又不纯化 好像是有中和的说法   
有篇文章  万方数据库里的 自己去找一下吧
复合甲醛中和剂对鸡新城疫灭活疫苗的影响   
<<中国微生物学会兽医微生物专委会学术年会中国畜牧兽医学会生物制品学分会第九次学术研讨会>>2003年 第9卷
作者: 王莉莉, 艾武, 李玉峰, 王春玲, 李峰, 牟建青,


5#半拉木匠

序道

不知道楼上用多大浓度的甲醛量，木匠做过类似试验有发言权，为了排除其他因素，还是确定下是否有甲醛引起的细胞脱落，也就是多做个对照的问题，很容易排除的。其实用中和的方法去除，需要考虑更多的因素，同样有量的限制，因为又引入了一个不安全或者说外界的因素，用亚硫酸氢钠中和看多过篇外文文献，不过一时找不到具体的量了。

6#pipi302

序道

我们实验室是这样做的：
1。我们的细胞苗用的是0。001%的甲醛灭活，然后用等量的亚硫酸氢钠中和甲醛作用。直接接种于单层细胞，盲传3代，检测核酸。
2。不用等量的亚硫酸氢钠中和甲醛作用，稀释1000倍后上细胞盲传

我认为在这里造成细胞死亡的原因有 ：1，甲醛含量过高。2， 细胞状态不好。3，灭活不彻底


11#HAZE

序道

不知道你说的是什么情况，我做这项检验几年了也没发现这样的问题，除非是原液没有稀释就直接接在细胞上，否则细胞不会死的。  


12#花谢花飞

序道

不知道你说的是什么情况，我做这项检验几年了也没发现这样的问题，除非是原液没有稀释就直接接在细胞上，否则细胞不会死的。  


12#花谢花飞

序道

正常的情况下，如果稀释10倍再接种细胞，应该没有问题，第一代细胞状态稍差，盲传时没有问题。出现脱落现象，应该有两个原因，一是灭活时实际甲醛量大，一是细胞养的不好。

13#zlai123

序道

没有好办法，亚硫酸氢钠只能中和甲醛的灭活效力，对细胞的毒性作用仍然存在。万分之2的浓度对细胞毒性就很大了，而这个浓度不能灭活病毒。
一是，继续盲传，连续稀释，这取决于你灭活病毒的甲醛浓度
再就是更换灭活剂，甲醛已经不推荐使用了


17#严厉

序道

我以前遇到过同样的情况，透析去除甲醛，再除菌过滤，接种细胞，盲传两代，判定灭活效果即可！

22#lijingliang