[转移贴]关于细胞变黑原因的讨论

cao1976

原贴由gaozx123发表于 2009-4-3 10:42

我养的是HepG2.2.15细胞，G418抗性，原来应该是透亮的细胞，可是现在发黑，细胞重叠成团现象严重（并未达到传代要求），细胞贴壁性也不如以前，换一次培养液也会有细胞脱落。细胞内部有一些亮的小泡泡，外部也有一些泡泡，不过看似与胞内的不太一样，贴壁并不生长，应该不是染菌。可是目前的细胞状况很让人揪心，请各位帮忙分析讨论一下可能的原因。
本人认为可能与细胞传代次数过多，细胞变老有关，但是这样的细胞应该能够无限传代的。所以还望高人指点，如何调整？

cao1976

Apoptosis2008发表于 2009-4-3 12:22 :

我也遇到这种问题了 我养的是PK细胞，不知具体原因，不敢用于正式实验

cao1976

christinasisi 发表于 2009-4-3 14:15 :

回复 1# gaozx123 的帖子
多加点血清，就是细胞发生凋亡了。我们养HEPG2一般要用20％的血清

cao1976

yuhuanlibj发表于 2009-4-4 08:26 :

我个人认为2.2.15细胞的消化很重要，若消化的不是太好会大大影响贴壁，而且一代没有消化好，需要2-3代才能缓过来。

cao1976

gaozx123发表于 2009-4-6 10:57:

to 4楼 yuhuanlibj 的帖子
我把细胞用0.25%的胰酶加EDTA（购买的），消化1分钟，加2mL含20%胎牛血清DMEM培养基吹打混匀后，补加培养基后放入培养箱培养。但是都过了24小时了大部分细胞都还没有贴壁，是不是血清含量高，细胞贴壁性就不好啊？有关系吗？  

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to 3楼 christinasisi 的帖子
我用20% 血清养了，我想知道细胞凋亡还能恢复过来吗？  

cao1976

anzaishi 发表于 2009-5-12 16:24 :

“细胞重叠成团现象严重（并未达到传代要求）”“细胞内部有一些亮的小泡泡，外部也有一些泡泡”---------从这些现象分析楼主应该是消化时没消化好，加上吹打过于剧烈，导致细胞损伤比较严重的后果。HepG2细胞是比较难消化的细胞之一。楼主可以适当延长消化时间，我们消化的话一般是3-5min（胰酶浓度和您一样）。这样的细胞状态不好，如果有可能的话，就重新复苏新的细胞株吧。在挣扎下去也很难把她的状态调节回来了。
细胞比较脆弱，消化时，尽量小心，避免剧烈反复吹打，否则就像人受伤了要流血结疤一样，祝楼主实验顺利！