血清学方法在几种猪病毒抗体检测中的应用进展

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随着养猪业的发展，猪群的密度越来越大，导致猪病越来越错综复杂，而在多重感染的疾病中，80%是病毒病，病毒性疾病已占据首要位置。因此，对病毒病的诊断变得尤为重要。病毒性病原的常规诊断方法有病毒分离、电镜观察、核酸探针、聚合酶链式反应、血清学等方法。而目前临床上最为常用的方法就是血清学检测技术，血清抗体的检测对于疾病诊断、免疫效果的评估和免疫时机的选择等具有重要意义，对于建立猪场的基准线、建立疾病预警系统也非常重要。本文就血清学的类型及血清学方法在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬、圆环病毒、细小病毒、口蹄疫等病毒抗体检测中的应用进展做一综述。

1血清学检测技术

1.1检测原理

　　病原微生物（病毒、细菌及其他微生物）均可以刺激机体产生相应的抗体，这种抗体与其相应的抗原能够发生特异性反应，血清学方法就是建立在这特异性反应基础上的检测技术。

1.2类型

　　主要有凝集试验（包括间接凝集、直接凝集），沉淀试验（包括絮状沉淀试验、琼脂扩散试验、免疫电泳），补体结合反应、中和试验、免疫标记抗体反应（包括荧光抗体、酶标抗体、放射性标记抗体、发光标记抗体等）。

2血清学方法在猪病毒抗体检测中的应用

2.1猪瘟

　　猪瘟病毒抗体检测方法主要有正向间接血凝试验（IHA），间接ELISA、Dot-ELISA、胶体金免疫层析试纸条（GICA）、琼脂扩散试验（GDP）等。马超英应用四种方法分别对142份猪血清样品检测，结果显示，间接ELISA灵敏性最高，IHA法对血清要求高，灵敏性稍低，Dot-ELISA与GICA操作简单，但灵敏性最低。方先珍等用三种方法对65份猪血清样品检测，结果表明，间接ELISA和IHA的符合率为89.23%，而间接ELISA与阻断ELISA的符合率为47.69%，IHA与阻断ELISA的符合率为50.77%，这与其检测血清抗体的类型不同有关。

2.2猪繁殖与呼吸综合征

　　猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体检测方法有免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA），ELISA、GICA等。WensvoortG等首次建立起PRRSV血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测方法，至今是欧洲许多国家使用的血清学诊断方法。IPMA不仅能够检测病毒抗原，也可检测病毒抗体。ELISA作为目前普遍应用的免疫检测技术，可用于检测PRRSV抗体，主要通过S/P值分析猪群抗体水平的稳定性及猪群的健康状况。王刚等1996年通过细胞培养PRRSV，利用NC膜作为载体，成果建立起检测PRRSV抗体的Dot-ElISA。据报道，国产ELISA试剂盒在PRRSV感染后8天内可检出感染抗体，比国外的试剂盒提前10天，具有较高的可靠性。

2.3伪狂犬

　　伪狂犬病毒（PRV）抗体检测法有ELISA、GICA法、乳胶凝集试验（LAT）等。gE-ELISA是一种灵敏度很高的ELISA，它是根据疫苗株缺失的糖蛋白构建的一种鉴别ELISA。由于涉及全病毒，因此存在一定的安全隐患，Kimman等于1996年改进此法建立起一种间接双抗夹心gE-ELISA。黄骏明等应用混合纤维素酯微孔滤膜作为固相支持物建立了Dot-ELISA，而中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制的Dot-ELISA试剂盒已经投入使用。王生育等应用ELISA试剂盒与GICA两种方法对64份猪血清样品进行伪狂犬病毒抗体检测，结果表明两种方法检测的抗体阳性率均为62.5%，两种方法都具有微量、特异、准确的优点。LAT利用抗原抗体特异性结合的性质，根据能否发生凝集反应来判定是否存在伪狂犬病毒感染，市面上已有LAT试剂盒销售。