[转移贴]-求解释：phh21里插入的流感序列是正的还是负的？

rojjer

原帖由谷睿杰 发表于4/7/2012 08:33

我现在在试着拯救流感病毒，但是不知道phh21里插入的流感序列是正的还是负的？求解释啊

rojjer

suenmomo：
双向表达
亦正亦负


极乐净土：
PHH21 质粒只表达负链vRNA。cRNA 插入在human polI 和45sRNA 终止子之间。需要共转染表达病毒聚合酶和NP蛋白的质粒。
楼主不要太着急了，还是认真读几篇经典的文献，然后才拯救病毒。磨刀不误砍柴工，理论功底不能缺的。

rojjer

谷睿杰：
3# 极乐净土


但是我看的那个文献12质粒系统的 PHH21及可以表达VRNA也可以表达mRNA表达蛋白呢。表达VRNA 的不应该是插入的是负链的RNA么  


谷睿杰：
2# suenmomo


12质粒系统也能双向表达么？ 8质粒系统是双向表达吧


极乐净土：
PHH21只表达vRNA，12 质粒系统的原理是一组质粒表达vRNA，另一组表达病毒复制相关的蛋白。流感病毒是负链病毒，所以vRNA不能作为mRNA直接翻译病毒所需的蛋白。因此就必须额外共转病毒病毒聚合酶和NP蛋白的质粒。流感有8个片段，在加上4 个与表达病毒复制相关的蛋白，总共需要12 质粒。所以叫做12 质粒系统。
PHH21质粒表达的VRNA可以被病毒的聚合酶识别，初始以此为模板转录成mRNA，然后翻译病毒蛋白。后期vRNA被转录成cRNA，病毒聚合酶以cRNA为模板转录成vRNA。虽然cRNA和mRNA都是正链但是由于cRNA缺乏帽子结构，不能翻译成病毒蛋白，但是病毒基因组的完整拷贝。相反mRNA不是病毒基因组的完整拷贝，病毒基因组有一段终止信号，使的转录终止。


谷睿杰：
6# 极乐净土


thank you .解释的很好