[转移帖]如何提高疫苗的免疫原性

cao1976

原帖由论坛会员yyc359发表于 2011-3-13 22:47 |

活菌载体疫苗的免疫原性差可以从几方面提高呢?恳请专家的指导.  

cao1976

rojjer 发表于 2011-3-14 09:53

活菌载体疫苗可以有效激活innate免疫的，免疫原性理论上应该不差吧。
楼主要求多高？？？
是不是抗原设计有问题？
可以考虑优化抗原设计，疫苗递送途径。另外，分子佐剂（如细胞因子等）也可以考虑考虑

cao1976

rojjer 发表于 2011-3-14 09:53

活菌载体疫苗可以有效激活innate免疫的，免疫原性理论上应该不差吧。
楼主要求多高？？？
是不是抗原设计有问题？
可以考虑优化抗原设计，疫苗递送途径。另外，分子佐剂（如细胞因子等）也可以考虑考虑

cao1976

mimimi发表于 2011-3-14 14:06 |：：

恩 请问你用的什么细菌做活载体
如果细菌本身的侵袭及定植能力不行的话， 也可能导致免疫原性差
这可能得改造细菌

还有一个问题就是，你的抗原是表达在细菌表面呢 还是抗原质粒放在细菌里，细菌释放到内表达？
如果是前者 可以改细菌的表面呈递系统
如果是后者 这可能还涉及到质粒的释放效率问题  

cao1976

yyc359发表于 2011-3-14 16:42 ：

To Rojjer
我的要求不是很高, 因为在SDS-PAGE上很难辨别是否表达, 只能做western-blot才能看出来. 表达的量也很小. 如何优化抗原设计呢? 能再给我一些建议吗?非常感谢.

——————————————————

TO mimimi
首先很感谢你的帮助: 我用的是乳酸菌做活载体,定植能力很好, 但本身的侵袭能力不行可能是导致免疫原性不好的主要原因, 但如何改造细菌呢?
我的抗原有在细菌表面表达的, 也有分泌表达的, 如果像您所说的如何改造表面呈递系统和质粒的释放效率问题呢?
非常感谢你的帮助!期待你的回复!

cao1976

mimimi发表于 2011-3-15 13:50 |

To  yyc359

由于我也做过一些相应的工作，遇到和你一样的问题，也是抗原免疫原性不好
最近也在考虑改造细菌

作为疫苗载体本身，乳酸菌的侵袭能力要适度，不能过强也不能过弱， 强了容易导致副反应。改造的方法一般是通过通过同源重组的方法敲掉某些基因，具体哪些基因敲到会增强侵袭力，取决你的乳酸菌本身的特性。
如果是原核表达，把抗原呈递在细菌表面的话，对于侵袭力没有太高的要求。定植力好的话，估计就能较好的提高抗原免疫力。这时候的重点，我觉得应该是抗原在细菌表面表达的效率变成了重点。

如果是真核表达，侵袭力很关键，不然细菌不能很好的进入抗原提呈细胞内，并释放抗原质粒。

质粒的释放效率可能涉及到细菌的分泌系统，或者是抵抗细胞消化的能力。

这些就是我遇到的问题，我也还没有很好的解决办法，还在思索当中
大家共勉

最后一个小问题：你用的是什么乳酸菌，做的是什么抗原，用于什么用途？ 如果方便，我想多了解了解
谢谢

恩 比较拖拉 还忘了一个问题

关于表面呈递系统，我了解到的做法就是，把目的抗原融合表达到本身就表达在细菌外周的蛋白当中。
这比较适合于一些非糖蛋白抗原

这个做法对于表达糖蛋白抗原有缺陷，所以我比较关注的是真核表达策略，

cao1976

yyc359发表于 2011-3-15 14:16 |

To mimimi
我听说可以通过换启动子的方法来提高表达量, 但不知道是否可以换成大肠杆菌的启动子用来进行高效表达, 是否可行?
我的理解是免疫原性不好是因为抗原的表达量不够, 不能形成对机体的足够刺激, 所以改造载体应该能对提高表达量有一定作用吧?  

PS 我特别急需想把这个问题解决, 但有些关于我本人实验的问题不方便在论坛上公布, 能用QQ探讨吗? 非常感谢你的帮助!