【免疫学检验】知识点整理（第二部分）

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8 化学发光免疫技术：

1 化学发光剂

【酶促反应发光剂：辣根过氧化物酶HRP发光剂（常用底物为鲁米诺及其衍生物和对-羟基苯乙酸）；碱性磷酸酶ALP发光剂（AMPPD：有2~30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续光，在15min达到高峰；4-MUP：在360nm激发光的作用下，发出448nm荧光）

【直接化学发光剂：改变溶液pH就能发光。口丫口定酯AE在含过氧化氢的稀碱溶液中能发光。

【电化学发光剂：通过点击表面进行电化学反应而发出光的物质。

化学发光剂三联吡啶[Ru(bpy)3]3+和电子共同三丙胺TPA在阳性点击表面课同时失去一个电子而发生氧化反应。二级的三联吡啶聊被氧化成三家，成为强氧化剂，TPA失去电子后被氧化成阳离子自由基，课自发失去一个侄子，形成自由基，是一种很强的还原剂，课将一个高能量电子递给三家的三联吡啶聊，使其形成激发态二价。发射场620nm的广州，恢复基态。

【电化学发光剂特点：分子小，空间位阻小。衍生物与免疫球蛋白结合不印象起可溶性与免疫性。水溶性好，稳定性高。

9 补体检测及应用:

0 基本概念

【补体：存在于人或动物血清中的一组具有酶样活性的不耐热和功能上连续反应的蛋白质，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件。

【溶血素：抗绵羊红细胞抗体。实验前56摄氏度30分钟灭活补体，预先用免疫溶血实验滴定溶血素效价（将不同稀释度的溶血素和等量的补体与SRBC混合于试管中，37摄氏度30分钟水浴。完全溶血的试管中液体红色透明，离心后无细胞沉降；完全不溶血的试管中液体浑浊，离心后红细胞完全沉降，上清液无色透明。一产生完全溶血的溶血素的最高稀释度作为其效价，确定为1单位。补体结合使用一般采用2U溶血素）

【经典激活途径：机体体液免疫反应的主要效应机制。抗原抗体复合物依次激活C1q、C1r、C1s、C4、C2、C3形成C3转哈酶（C4b2b）与C5转化酶（C4b2b3b）。

【MBL途径：病原微生物表面糖结构与甘露聚糖结合凝集素结合，进而依次激活MBL相关丝氨酸蛋白酶MASP、C4、C2、C3形成和经典激活途径相同的C3和C5转化酶。激活过程无须抗体参与。

【旁路激活途径：不经过C1、C4、C2途径，而由C3、B因子、D因子参与的激活过程。

1 补体结合试验CFT原理、技术要点和评价

【原理：（反应系统，指示系统，补体系统）一直抗原与待测抗体；绵羊红细胞与相应溶血素结合，成为致敏绵羊红细胞；反应系统与补体系统先发生反应，然后再加入指示系统，根据致敏绵羊红细胞有无溶血来判断。（有相应抗原或抗体存在，不发生溶血，试验阳性）

【评价：（不需要特殊仪器，对实验室条件要求低。补体活化过程的放大作用，使灵敏度高0,05ug/ml抗体。可用于定性或半定量检测，多种类型的抗原或抗体。）（影响因素复杂，操作步骤繁琐且要求严格，补体不稳定。）

2 血清总补体溶血活性（CH50）测定原理和应用

【原理：血清中补体经典活化途径的溶血活性。补体C1-C9被抗体（溶血素）致敏的绵羊红细胞活化并使后者溶解。当红细胞与溶血素的量一定时，补体的量及活性与溶血程度正相关，。在50%溶血附件，S形曲线最都，补体活性稍有变化，溶血程度就有明显变化，以50%溶血为反应终点比100%更敏感。

3 补体旁路途径溶血活性（APH50）测定和评价

【涎酸课抑制B因子的活性，家兔红细胞中的较低，课激活血清中的B因子，导致补体旁路途经激活，兔细胞溶解。在红细胞量一定时，在规定反应条件下，溶血程度与血清中参与旁路活化的补体量及活性呈正相关，50&溶血为重点。

【反映C旁路途经的溶血功能，

4 C4溶血活性的测定和评价

【将豚鼠血清用氨水处理去除其中的C4，这种C4缺乏血清R4不能使溶血素致敏的SRBC溶解，当加入含有C4的受检血清后，补体连锁反应恢复，即可到账致敏的SRBC溶解。溶血程度与待测血清中的C4活性相关。50%溶血为反应终点。

互补偿值。

M蛋白:单克隆免疫球蛋白，是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白；

冷球蛋白: 一组低温下发生沉淀，加温后又复溶的Ig。

本-周蛋白（bence-Jones）:尿中游离的免疫球蛋白轻连。

免疫增殖病（immunoproliferative disease）：LC异常增殖引起的疾病.

重链病(heavy chain disease):突变的浆细胞产生异常增多的重链或质量不能与L链装配的 Ig重链，血清和尿中H链过剩导致的疾病。

轻链病：异常的LC产生大量的Ig的L链在肾脏和内脏组织，导致肾损伤和淀粉样病变的疾病。

自身免疫机体免疫系统对自身成分发生免疫应答的现象，为生理性免疫应答的一部分。

自身免疫病（ AID）因机体免疫系统对自身成分发生免疫应答而导致的组织损伤或功能紊乱，属于病理性免疫应答。

抗核抗体（ ANA）：抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分[脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等]作为靶抗原的自身抗体的总称。

类风湿因子（ RF）：自身免疫病人体内表达的抗自身变性IgG的IgM类抗体。

隐蔽抗原：指体内在解剖位置上某些与免疫系统隔绝的成分，如眼组织、精子等。当外伤、手术和感染等情况下，释放并与机体免疫系统接触可以引起免疫应答，导致自身免疫病。

超敏反应：又称为变态反应，是指机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。

变应原：是指能够选择性地激活CD4＋Th2细胞及B细胞，诱导产生特异性IgE抗体应答，引起变态反应的抗原性物质。

皮试：用少量抗原注射、挑刺或划痕等方法注入到受试者皮肤，用于变应原的检测。

1.免疫防御功能异常可导致(感染)和(免疫缺陷)疾病。

2.抗原抗体反应的特点有 特异性、比例性 、可逆性

3.抗原抗体反应的温度一般以15～40℃为宜，最适温度37℃

3．影响抗原抗体反应的环境因素主要有电解质、pH、温度

4．某些特殊的抗原抗体反应对温度有一些特殊的要求，如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合最好20％ 以上反而解离。

5．抗原抗体的结合分子间的引力包括静电引力、 范德华引力、氢键引力和疏水作用力

2.间接凝集反应的类型包括正向间接凝集、反应反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应和协同凝集反应四种类型。

3参与凝集反应中的抗原称为（凝集原）抗体称为(凝集素)试验有(玻片法)(试管法)(玻片法)常用的直接凝集

4．在间接凝集反应中正向凝集反应是用(抗原)致敏载体以检测标本中相应的(抗体)而反向间接凝集反应是用(抗体)致敏载体以检测标本中相应(抗原)

5．间接抗球蛋白试验可用已知抗原型红细胞检测血清中的(不完全抗体)可用于输血前的(交叉配血)试验。

1．免疫沉淀反应是（可溶性抗原）与（相应抗体）特异性结合

2．棋盘格法（抗原 ）和（抗体）同时稀释，可一次完成（抗原）和（抗体）的滴定

3．单向琼脂扩散是待测抗原从含有定量（抗体）的（凝胶）内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成（沉淀环）。

4．Maneini曲线适用于大分子抗原的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，抗原浓度与（扩散环直径的平方）呈线性关系，常用（普通）坐标纸作图。

5．Fahey曲线适用于小分子抗原的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，沉淀环直径与（抗原浓度的对数）呈线性关系，常用（半对数）坐标纸作图。

6.双向琼脂扩散试验可对抗原或抗体的存在、含量和相对分子量进行分析，沉淀线靠近抗原孔指示（抗体含量）较大；靠近抗体孔则指示（抗原含量较高）；不出现沉淀线则表明（无对应的抗原和抗体）

7.免疫电泳是将（电泳）与（双向免疫扩散）相结合的一种免疫化学分析技术。

8.火箭电泳是（电泳）与（单向免疫扩散）相结合的免疫技术。

9.对流免疫电泳是（电泳）与（双向免疫扩散）相结合的免疫技术。

10.对流免疫电泳中，抗体流向负极，是因为（抗体分子量大）（电泳 ）速度小（电渗）速度。

1l.免疫浊度测定的基本原理是抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成（免疫复合物），使反应液出现（浊度），并可根据其推算出抗原或抗体的量。

12.根据Rayleigh方程，散射比浊法中的散射光强度与入射光波长成（反）比，与粒子的浓度和体积成（正）比。

13.速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的（最快时间段）的散射信号值，此时的散射信号最强，速率散射信号值最大。

14.免疫胶乳浊度测定的原理与透射比浊法相似。载体为大小适中、均匀的胶乳颗粒其直径应稍（小于）入射光波长目前多用（200）nm的胶乳颗粒。

15.免疫浊度测定的基本原则之一是反应体系中必须始终保持（抗体）过量。

16.凝胶内沉淀试验包括（单向扩散试验）和（双向扩散试验）抗原抗体最适比的基本测定方法为（抗原稀释法）和（抗体稀释法）。

1．标记免疫技术的示踪物有(酶）、(放射性核素)、(荧光素)、(化学或生物发光剂)(胶体金 )

2．放射免疫技术可分为(放射免疫分析)和(免疫放射分析)两种基本类型。

3.采用125I制备标记物的基本原理是以放射性碘原子置换被标记物分子中(酪胺酸或酪胺残基)或(组胺残基)上的氢原子。

1.荧光免疫技术的主要类型包括(荧光抗体染色技术)（荧光免疫测定技术)。

2．荧光物质有(荧光素)和(其他荧光素物质)。

3．荧光抗体染色技术可分为(荧光免疫显微技术)和（流式荧光免疫技术)。

4．镧系稀土元素标记物制备的螯合剂有(多羧基酸类螯合剂)、(B-二酮体类螯合剂)、(BCPDA)和(菲洛林)

5．荧光免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的荧光标记物而分为(均相)和(非均相)两种类型。

6．非均相荧光免疫测定法包括(时间分辨荧光免疫测定)（荧光酶免疫测定)。

7．均相荧光免疫测定法包括(荧光偏振免疫测)和（底物标记荧光免疫测定)。

8．荧光素标记抗体的方法有(搅拌标记)和(透析标记法)。

l.膜载体酶免疫测定技术的类型主要有(斑点-ELISA免疫渗滤试验)、(免疫层析试验)、(免疫印迹法)

3.酶免疫组织化学技术常用的酶有(HRP )、(AP )和(GOD )。

4．EIJSA方法类型主要有(双抗体夹心法)、(间接法)、(竞争法)和(捕获法)。

5．ELISA中三种必要试剂是(固相的抗原或抗体)(酶标记的抗原或抗体)(酶的反应底物)。

6．制备酶结合物常用的方法有(戊二醛交联法)和(过碘酸盐氧化法)。

7．在稀释液和洗涤液中加入(吐温一20)，可以去除非特异性吸附。

8．均相酶免疫测定技术的类型主要有(酶增强免疫测定技术)(克隆酶供体免疫分析技术)。

9．非标记抗体酶免疫组织化学技术的类型主要有(酶桥法)、(PAP法)、(双桥PAP法) (APAAP法)。

10. (SDS-PAGE), (蛋白质转运)和(酶免疫测定)三项技术结合而成形成免疫印迹法。

11.常用于HRP标记抗( 戊二醛交联法 )和( 过碘酸钠法 )。

1.不受位阻效应影响,更易发挥生物素活性作用的是（BCNHS）。

2.用于标记蛋白质醛基的,适用范围较BHZ宽的活化生物素是（BCHZ）。

3.在一定波长的光照射下,光敏基团可转变为芳香基硝基苯而直接与腺嘌呤N7位氨基结合的是（光生物素）。

4.生物素化蛋白质衍生物有二类,一种是（生物素化的大分子生物活性物质）,另一种是（标记材料结合生物素后制成的标记物）。

5.用于亲和素标记的物质中,最常用的是（酶）, （异硫氰酸荧光素(FITC)）和（胶体金 ）。

1.用丙酮做固定剂的抗原是（免疫球蛋白）；用1%聚甲醛做固定剂的抗原是（激素）；用10%甲醛做固定剂的抗原是（类脂质）；用95%乙醇做固定剂的抗原是（蛋白质）；用四氯化磺做固定剂的抗原是（酶）。

2.免疫染色对特殊标本的进一步处理常用 （冰冻切片）和（石蜡切片）法。

3.免疫组化染色后，阳性细胞的染色分布有三种类型，分别是（胞质型）、（细胞核型）和（细胞膜表面型）。

4.酶免疫组化技术中最常用的酶有（辣根过氧化物酶）（碱性磷酸酶）及（葡萄糖氧化酶）。

5.免疫电镜标本的制备主要有（非包埋法免疫染）（包埋前免疫染色）（包埋后免疫染色）

6.免疫组化中最常用的制片方法是（蛋白酶消化法）和（非特异吸附法）。

1．金免疫技术主要有(金免疫组织化学染色技术)和(金免疫测定技术)，前者包括(免疫金(银)光镜染色技术)和(免疫金电镜染色技术)；后者包括(斑点金免疫渗滤试验)和(斑点金免疫层析试验)等。

2．免疫金是指(胶体金与抗原(抗体))的结合物，在免疫组织化学染色技术中，习惯上称之为(金探针)

3．斑点金免疫层析试验方法学类型有(双抗体夹心法)(竞争法)和(间接法)。

4．渗滤装置是斑点金免疫渗滤试验试剂盒中主要组成部分之一，由(塑料小盒)、(吸水垫料 )和(点加了抗原或抗体的硝酸纤维素膜片)三部分组成。

5．斑点金免疫渗滤试验试剂盒由(渗滤装置)(胶体金标记物)和(洗涤液)组成。

6．用于电镜的免疫金法可分为(包埋前染色)和(包埋后染色)两大类。

7．免疫金电镜染色技术包括(标本包埋)、(免疫组化染色)两个主要步骤。

8．为了消除待测血清标本中(非特异性IgG)的干扰，斑点金间接免疫层析法测抗体常设计成（反流,免疫层析法 ）

1．PBMC包括（淋巴细胞）和（单核细胞 ）。

2．在反相溶血空斑试验中每一个空斑代表一个（分泌Ig的细胞）。

3．B细胞表面特异的标志是（SmIg）。

4．常用的测定淋巴细胞活力的方法是（台盼蓝染色法）。

5．淋巴细胞转化情况的判定方法有（形态学方法）、（H—TdR掺入法）和（ MTI"检测法 ）。

6．淋巴细胞转化试验应用的同位素是（3 H ），细胞毒试验应用的同位素是（51Cr）

7．分离外周血白细胞常用的方法是（自然沉降法）和（聚合物加速沉降法）。

8．去除白细胞悬液中残留红细胞的常用方法有（无菌蒸馏水低渗裂解法）和（0．83％氯化铵处理法）。

9．去除单个核细胞悬液中单核细胞的常用方法有（黏附去除法）和（羰基铁粉吞噬去除法）。

10．检测T细胞数量的花环技术包括（E花环试验）（葡萄球菌花环法）和（抗体致敏红细胞花环法 ）；检测B细胞数量的花环技术主要有（EA花环试验）和（EAC花环试验）。

11.淋巴细胞和单核细胞的密度为 （1.077+0.001）。

12．外周血经Ficoll分离液离心后从上到下分为（血清）（PBMC ）（粒细胞、红细胞）层。

1．活化的TH1细胞产生的细胞因子主要有（IL2 ）（IFN）和（IL12 ），而TH2细胞主要产生的细胞因子为（IL4）（IL5）和（IL10）。

2.细胞因子常用的检测法包括（生物学检测法）（免疫学检测法）和（分子生物学检测法 ）。

3.ELISA 测定法测定细胞因子常用（双抗夹心法）。

1．补体参与的反应试验类型包括(免疫溶血试验)(补体结合试验)、(补体依赖的细胞毒验 )和(免疫黏附试验).

2．参与补体结合试验的试剂可分为(指示系统)和(反应系统)两个系统。

3．Ⅲ型变态反应疾病患者的血清中补体水平(降低)。

4．补体的最佳保存温度是(一20℃以下)。

5．CH50试验中有（ 绵羊红细胞)(溶血素 )和(人血清 )参与反应。

1．免疫球蛋白根据重链的不同可分为（IgM），(IgG ），（IgA），(IgE）和 （IgD ）

2．免疫固定电泳的特点是：（周期短）（敏感性高）(分辨清晰）（结果易于分析）

3．Ig 中k/λ比率正常范围是（1.2～2.4）

1．肿瘤抗原可分为（ 肿瘤相关抗原）和（肿瘤特异性抗原）两类。

2．肿瘤标志物检测的临床意义，归纳起来有（早期普查）（肿瘤诊断 ）和（监测病情）等

3．肿瘤标志物的检测对临床某些肿瘤有重要辅助诊断价值，如：AFP可辅助诊断（肝癌）可辅助诊断（结肠癌 ）PSA可辅助诊断（前列腺癌） 。

4．细胞免疫是抗肿瘤免疫的重要机制，参与抗肿瘤免疫的细胞主要有（T细胞 B细胞 NK 细胞 树突状细胞 )等。

5．根据肿瘤抗原分布的范围，可将其分为（肿瘤特异性抗原）和(肿瘤相关抗原）两大类。

1．宿主抗移植物反应根据临床出现症状情况一般分为（超急性排斥），（急性排斥 ）和（慢性排斥）三类。

2. ( HLA)是不同个体间进行器官或组织移植时发生排斥反应的重要成分。

3. HLA三类分子中Ⅰ、Ⅱ类分子是能发生移植排斥反应的首要抗原尤其是（HLA-DR ）位点。

4. HLA-A、B、C和HLA-DQ、DR抗原采用( 补体依赖的微量细胞毒)试验检测