[转移贴] 求助，等待高手的神迹。关于重组蛋白制备抗体相关问题

cao1976

原贴由zshinner 发表于 2011-4-20 11:05
http://biosky.haotui.com/thread-21658-1-4.html

各位前辈，我很喜欢这个BBS经常上的。当然我不是做病毒的，而且是相当不主流的微生物的一类。
我现在在纠结着怎么制备我重组蛋白抗体的事宜。
我期中一基因有可溶，没侧浓度，跑胶觉得量还行。但是我们实验室的主流做法是直接包涵体，过个NI柱子，切胶，磨胶，打兔子老鼠的。。。。感觉好残忍、而且变性的蛋白是线性的，空间表位怎么样？是否用可溶的蛋白来做抗体更好点？比如一些IFA，免疫共沉淀。
还有一个基因，可溶很少，有种让人绝望的感觉。是否用包涵体来做？我们实验室都没人复性过。。。。能否在那个变态的8M尿素直接打兔子老鼠。。。。感觉这样更残忍。。。。。

cao1976

ww3149 发表于 2011-4-20 13:15 ：

To 1# zshinner


可溶的直接过Ni柱不更好吗？
收到的样品再用PBS或PB透析下
我觉得这样靠谱点
也更符合实验要求
或者某些抗原本身就是线性的表位
那样的话变性的蛋白对结果没什么影响

8M的尿素直接动物
这个很难评价
没见过这样干的

个人意见
研究不深
抛砖引玉吧