本帖转自:http://biosky.haotui.com/thread-12071-1-2.html 作者:walkundersky7 i5 Y1 e5 B% E8 i; C( [4 i6 A
" \. f3 z1 x, F聚合酶链反应(PCR)自发明至今的20年来,经过不断的开发和改进,现在已经广泛应用在诸多领域,是分子生物学、临床诊断、法医检验等实验室的常规技术。
! ?/ p1 R3 @+ e0 e/ e; y 本书是美国冷泉港实验室出版社PCR Primer:A Laboratory Manual第二版的影印本,是第一版的全面更新和升级。本书由从事PCR研究的专家们共同研讨和撰稿,是一部最新、最权威的PCR技术实验手册。其内容从最简单的PCR操作到最新的技术改进,从最基本的PCR技术到各种奇思妙想的PCR应用技巧,无所不至,令读者目不暇接、备受启迪。具体内容包括PCR 导论、样品的制备、引物设计、PCR产物检测(定量和分析)、RNA样品的PCR、PCR介导的克隆、PCR法制备突变体、其他扩增技术等。每个操作都配有疑难解析和完整的参考文献以供答疑、检索。
9 `- M7 d; l5 G" f 本书是《分子克隆实验指南》的姊妹篇,可供从事分子生物学、遗传学、细胞生物学、生物化学以及医学各个领域研究的科研与教学人员参考,既是实验室必备的工具书,也是研究人员开阔眼界、拓展思路的不可不读之经典。
8 Z% J+ E- U3 s
" D( X, k9 v0 ]- \9 V目录
7 q* Z: _8 ^7 T4 u3 e3 w5 ^$ G9 f第1篇 PCR导论
/ ^" L: \2 M* \: d1 建立一个PCR实验室' D5 v4 a$ R W/ i0 H6 _: s0 j
2 PCR残留污染的处理:一种酶学策略1 Z, y5 U4 E) d( F% M) ^
3 高保真PCR酶6 @; i! Y$ o/ U; h; s2 P! ?
4 PCR的最优化和常见问题解析" v, \% j7 O# P
5 富含GC片段的PCR扩增
1 a% y$ \( k# z2 ^6 精确扩增大片段的技巧. w4 ?0 v& b( _6 O
7 PCR引物设计% u% M& g- U! Z7 ?
8 PCR扩增DNA的非放射性循环测序
, ^4 l5 v; L4 q3 s1 e$ ~( S5 n第2篇 样品的制备* C& ?( v; X8 M- ]' p0 M8 I7 c
9 DNA的纯化6 k `/ |# f) f/ u' N$ d
10 RNA的纯化
) m" y. C( c2 k* d8 A+ X11 激光捕获微分离技术原位定位基因表达 Y4 r, W: v+ P- S6 W1 L, t
12 克服PCR受抑制的策略0 Q1 W) h4 w7 g; y5 M
第3篇 RT-PCR方法
4 u5 |( u3 Y3 a0 n1 Q' y9 |13 相对定量RT-PCR和竞争定量RT-PCR内对照的使用/ `& k% L) j& T, y
14 四种实时PCR检测系统的比较:Bio-Rad I-Cycler、ABI、7700、Roche LightCycler、the Cepheid Smartcycler
$ A5 }8 G- V% [* N* `4 t, ~15 定量PCR的新技术9 n- ^+ x6 J. X
16 RNA的扩增:用镁激活的热稳定DNA聚合酶进行高温反转录和DNA扩增0 ] d) x7 i8 p' j- g4 K9 |
第4篇 PCR产物的检测:专门应用9 w$ V9 k5 }8 P* N. @! e
17 杂合性的丢失:一种鉴定肿瘤基因组上染色体区段缺失的多重PCR方法
. z* o" M2 |; e18 单链构象多态性分析
; n+ q: H. s6 m- Z( j8 {19 逆转录酶原位PCR% C! Q1 E' v7 r* x. ?3 h' s
20 灵敏快速的突变检测方法——错配位点的固相化学切割法
2 b1 ?6 E' }7 }* R+ s第5篇 用PCR分析基因的差异表达& r6 o4 R8 l" |. u8 p: D
21 PCR在基于微阵列的基因表达分析中的应用
' z0 d6 t( a& G1 B, ~0 ]' U22 利用抑制性消减杂交技术鉴定差异表达的基因4 c' d0 k/ w, Q' m: t O' }
23 基因表达分析中的荧光mRNA差异显示技术
1 _, [. o5 m* P f; w: ^& `" n8 Z第6篇 用PCR进行克隆5 N6 }: ?- `5 ~. |, l
24 以PCR为基础的文库筛选方法8 E" `- U3 \7 V! `& v
25 经典RACE(cDNA末端快速扩增)法的改进9 s9 [: ^7 [* y) `
26 用PCR合成和分析DNA文库- k) R+ x# P% P' {# [3 u. M- P7 \
第7篇 PCR产物的克隆' N+ H2 \) ]3 j [
27 克隆PCR产物的策略' c7 S0 `$ A7 Z* Y( v/ ?/ i- D) g1 H
28 PCR产物双向和定向克隆
G8 w, |& R+ b- R; a( O3 [29 核糖克隆:用含有一个核糖核苷酸末端的PCR引物进行DNA克隆和基因构建
3 v/ c" R1 f4 M/ c第8篇 利用PCR进行诱变
7 G5 ^1 U* a: ~, C' Q" v30 诱变PCR
5 I0 q- {; G9 h4 [31 快速PCR定点突变
1 n: H) e0 t7 M( O& h" F32 利用PCR来突变和合成新的重组基因
" j/ G8 f( r+ z+ A$ i8 D( s; P33 流线型基因装配PCR+ \7 N; y" T, n4 n
附录1 专利
/ j5 @. F0 c$ L# v附录2 在PCR中使用的寡核苷酸的修饰
! j0 d9 j# v) t$ j: q/ c* h附录3 注意事项
1 D j3 H# {2 S, v k附录4 供应商
k! P- w4 z( A" Z2 c: r索引
, t: J* d: B' ^
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